高速逆流色譜分離純化黃芩等中藥有效成分的研究.pdf

1、高速逆流色譜(high-speedcounter-currentchromatography，簡稱HSCCC)是新發(fā)展起來的一種液液分配色譜技術(shù)，與其它色譜技術(shù)相比，HSCCC具有很多的優(yōu)點：能夠避免分離樣品與固態(tài)載體表面因發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而造成的失活、變性、污染及不可逆吸附等不良情況；能節(jié)省昂貴的填料費用，節(jié)約溶劑的消耗，運行使用中的后續(xù)投入很低；高效、快速、上樣量大、回收率高。因此特別適合于從天然產(chǎn)物等復(fù)雜混合物中對某些特定成分進行高純

2、度單體的分離純化和制備工作。近30年來，隨著其理論與技術(shù)的日益發(fā)展完善，HSCCC在中藥活性成分的分離純化領(lǐng)域已成為最有優(yōu)勢的分離分析方法之一。 中藥是中國醫(yī)藥學(xué)的瑰寶，數(shù)千年來為中華民族的繁衍昌盛和人類的健康發(fā)展做出了不可磨滅的貢獻。然而，因為中藥成分復(fù)雜、產(chǎn)品質(zhì)量缺少量化的標準，另外多數(shù)單方及復(fù)方制劑的有效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不清楚，使得中藥在國際市場的銷售份額很低(不足3％)。因此，分離制備高純度藥用成分對照品、配合活性跟蹤入藥部位

3、的設(shè)計逐級分離制備活性成分，以規(guī)范中藥的產(chǎn)業(yè)發(fā)展，提高中藥及其制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，已成為中藥現(xiàn)代化過程中刻不容緩的任務(wù)，其中建立和改善中藥有效成分的提取分離技術(shù)是實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的核心工作。 本文論述了應(yīng)用HSCCC，采用優(yōu)化的實驗條件對常用中藥黃芩、辛夷、防風、山茱萸和小薊中的活性成分進行分離純化的方法。經(jīng)過分離后，所得化合物經(jīng)高效液相色譜(highperformanceliquidchromatography，簡稱HPLC)檢測，

4、純度均大于98％，所得化合物的純度已達化學(xué)對照品的要求。望春花素和望春花黃酮醇苷Ⅰ的化學(xué)結(jié)構(gòu)經(jīng)過核磁共振氫譜(1HNMR)進行了鑒定；其它化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)通過核磁共振氫譜(1HNMR)與碳譜(13CNMR)進行了鑒定。該工作可以為黃芩等五味中藥的藥理研究與開發(fā)、中藥及其制劑的鑒別及質(zhì)量控制提供參考。 一、HSCCC分離純化黃芩中的黃芩苷和漢黃芩苷采用乙酸乙脂—甲醇—1％醋酸(5∶0.5∶5，V/V)作為溶劑體系，以下相作為流動相

5、，采用1.5ml/min的流速，通過一次HSCCC分離，成功地從120mg的黃芩粗提物樣品中分離得到了58.1mg的黃芩苷和17.0mg的漢黃芩苷，經(jīng)過HPLC檢測，純度分別為99.2％和99.0％?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)經(jīng)過1HNMR和13CNMR鑒定。 二、HSCCC分離純化辛夷藥材中的望春花素和望春花黃酮醇苷Ⅰ通過對不同的提取方法的考察，建立了中藥辛夷粗提物的最佳提取方法。提取得到的樣品采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶7∶4∶6

6、，V/V)和石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶7∶7∶3，V/V)作為溶劑體系，梯度洗脫，建立了一個辛夷藥材的HSCCC純化方法?？梢酝ㄟ^一次HSCCC分離，成功的從250mg辛夷粗提物中純化得到13.0mg望春花黃酮醇苷Ⅰ和65.2mg望春花素，經(jīng)過HPLC測定，純度分別為99.8％和99.2％。望春花黃酮醇苷Ⅰ和望春花素化合物的結(jié)構(gòu)經(jīng)過1HNMR得到鑒定。該法簡便快速，是一個制備高純度望春花素和望春花黃酮醇苷Ⅰ的快速、有效的方法。

7、 三、HSCCC分離純化防風中的色原酮類成分應(yīng)用高速逆流色譜法，采用乙酸乙脂—正丁醇—1％醋酸水(1∶4∶6，V/V)和乙酸乙脂—正丁醇—1％醋酸水(5∶0.5∶5，V/V)作為溶劑體系，經(jīng)過兩步HSCCC分離純化，建立了分離純化中藥防風中活性成分的一種快速簡便的方法。成功的從400mg的防風藥材粗提物中得到了102.4mg升麻苷，純度為98.4％；81.6mg5—O—甲基維斯阿米醇苷，純度為98.7％；31.4mg升麻素，純度為9

8、9.3％和12.7mg亥茅酚苷，純度為98.2％?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)經(jīng)過1HNMR和13CNMR得到鑒定。 四、HSCCC分離純化山茱萸中的莫諾苷和馬錢素利用大孔吸附樹脂對山茱萸藥材粗提物進行預(yù)處理，初步除去樣品中的大量雜質(zhì)，之后采用乙酸乙酯-正丁醇-水(4∶1∶6，V/V)作為溶劑體系，將粗提物進行HSCCC分離純化，可以通過一次HSCCC分離，成功的從50mg的山茱萸大孔吸附樹脂洗脫物中純化得到了20.7mg莫諾苷和8.5mg馬錢

9、素，經(jīng)過HPLC測定，純度分別為98.8％和98.6％，化合物的結(jié)構(gòu)經(jīng)過1HNMR和13CNMR得到鑒定。利用該方法分離純化中藥山茱萸中的莫諾苷和馬錢素，簡便快速，實驗結(jié)果令人滿意。 五、HSCCC分離純化中藥小薊中的蕓香苷和刺槐素采用大孔吸附樹脂法作為高速逆流色譜分離方法的一個輔助方法，將中藥小薊粗提物中的大部分干擾性的雜質(zhì)預(yù)先除去，得到的提取物通過HSCCC進行分離純化。采用乙酸乙脂—正丁醇—水(5∶1.5∶5)作為溶劑體系