HSCCC分離純化秦皮、烏藥等藥材中有效成分的研究.pdf

1、高速逆流色譜(High-SpeedCounter-CurrentChromatography,HSCCC)是利用螺旋管方向性與高○速行星式運(yùn)動相結(jié)合產(chǎn)生的一種獨(dú)特的流體動力學(xué)現(xiàn)象，使樣品中的各組分在相對移動的互不相溶的兩相(一相為固定相，另一相由恒流泵連續(xù)輸入，為流動相)中實(shí)現(xiàn)高效的接觸、混合、分配和傳遞，并按照分配系數(shù)的不同依次洗脫而獲得分離的一種液-液色譜技術(shù)[1]。它消除了由于使用載體而帶來的樣品吸附、污染、峰形變形等不良情況，此

2、外，它還具有高效、快速、進(jìn)樣量大和回收率高等優(yōu)點(diǎn)，已漸漸從最初的分析型色譜技術(shù)發(fā)展到具有較大容量的制備型色譜技術(shù)，特別適合天然藥物中有效成分的分離制備[2]，成為在中藥有效成分的分離純化領(lǐng)域最有優(yōu)勢的分離方法之一。 中藥化學(xué)成分較為復(fù)雜，所以想研究和應(yīng)用其中的有效成分，必須將它們從中藥中提取出來并進(jìn)一步加以分離和精制，得到有效單體。由于中藥所含成分種類繁多，含量有高有低，所以中藥有效成分的提取、分離和精制是一項(xiàng)十分艱巨而細(xì)致的工

3、作。而HSCCC非常適合天然藥物中有效成分的分離制備。目前，應(yīng)用HSCCC法在提取分離天然藥物中的黃酮、生物堿、香豆素、皂甙和蒽醌類衍生物等有效成分方面已獲得滿意結(jié)果[3]。 本文對HSCCC在中草藥有效成分的制備性分離純化方面的應(yīng)用進(jìn)行了研究，建立了分離純化秦皮、烏藥、知母、木蝴蝶和槐果皮中的有效成分的新方法，并利用紫外光譜(UV)、高效液相色譜(HPLC)、核磁共振波譜(NMR)等對目標(biāo)產(chǎn)物的純度和化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析和鑒定。

4、 1.HSCCC分離純化秦皮中的香豆素類化合物建立了HSCCC一次性分離、純化秦皮中多種香豆素類化合物的新方法。溶劑體系為正丁醇-甲醇-0.5％醋酸(5:1:5,v/v)。從150mg秦皮粗提物中一步分離純化出14.3mg秦皮苷(fraxin)，26.5mg七葉苷(aesculin)，5.8mg秦皮素(fraxetin)，32.4mg七葉素(aesculetin)；純度分別為97.6％，99.5％，97.2％和98.7％?；衔?/p>

5、結(jié)構(gòu)由其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)來確定。 2.HSCCC分離純化烏藥中的倍半萜類化合物應(yīng)用制備型HSCCC分離、純化烏藥中的倍半萜類化合物，所用溶劑體系為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5:5:6:4,v/v)。從450mg烏藥粗提物中一步分離純化得到40.2mg烏藥內(nèi)酯(linderalactone)，64.8mg烏藥醇(lindenenol)；純度分別為99.7％，98.2％。根據(jù)其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)確定了

6、化合物結(jié)構(gòu)。 3.HSCCC分離純化知母中的有效成分應(yīng)用HSCCC從500mg知母樣品粗提物中分離純化出了35.3mg新芒果苷(neomangiferin)，245.4mg芒果苷(mangiferin)，HSCCC溶劑體系為正丁醇-醋酸(1％)(1:1，v/v)。在這一分離過程中，順-扁柏樹脂酚和單甲基-順-扁柏樹脂酚留在了固定相中，收集固定相蒸干后，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(1:1:1.2:0.8,v/v)和石油醚-乙酸乙

7、酯-甲醇-水(1:1:1.4:0.6,v/v)兩溶劑體系以梯度洗脫的形式分離純化出17.2mg順-扁柏樹脂酚，12.4mg單甲基-順-扁柏樹脂酚。純度分別為：96.3％，98.0％，97.3％和98.2％。根據(jù)其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)確定了化合物結(jié)構(gòu)。 4.HSCCC分離純化木蝴蝶中的黃酮類化合物建立了HSCCC分離純化木蝴蝶中黃芩素(baicalein)和白楊黃素(chrysin)的新方法。兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸

8、乙酯-甲醇-水，固定相為(5:5:5:5,v/v)體系的上相，以(5:5:5:5,v/v)和(5:5:7:3，v/v)體系的下相為流動相進(jìn)行梯度洗脫。從300mg木蝴蝶粗提物中一步分離純化得到25.5mg黃芩素和36.6mg白楊黃素。經(jīng)HPLC分析，純度分別為99.2％和100％。其化學(xué)結(jié)構(gòu)由其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)來確定。 5.HSCCC分離純槐角中的異黃酮類化合物本文應(yīng)用HSCCC和大孔吸附樹脂從槐果皮中分離純化出

9、6種化合物：染料木素-7，4'-di-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)，染料木素-7-O-β-D-葡萄糖苷-4'-O-α-L-鼠李糖基-(1-2)-β-D-葡萄糖苷(Ⅱ)，山奈酚-3-O-β-D-槐糖苷(Ⅲ)，槲皮素-3-O-β-L-鼠李糖基-(1-6)-β-D-葡萄糖苷(Ⅳ)，染料木素-4'-β-L-鼠李糖基-(1-2)-α-D-葡萄糖苷(Ⅴ)，山奈酚-3-O-β-L-鼠李糖基-(1-6)-β-D-葡萄糖苷(Ⅵ)。用正丁醇-醋酸(1％)(1