色譜方法在純化蛋白中的應用研究.pdf

1、本課題主要內容是建立新的價廉高效的純化抗人EGFR單克隆抗體的色譜方法以及建立從雞蛋清中大規(guī)模純化溶菌酶、卵轉鐵蛋白和卵白蛋白的色譜方法。使用Protein A親和色譜、離子交換色譜(IEC)、疏水相互作用色譜(HIC)方法從小鼠腹水中純化抗人EGFR單克隆抗體，并使用BCA、ELISA、SDS-PAGE等方法檢測產品的蛋白濃度、活性、純度。使用離子交換色譜方法從雞蛋清中純化溶菌酶，卵轉鐵蛋白和卵白蛋白，并使用BCA、SDS-PAGE等

2、方法檢測產品的濃度和純度。實驗結果：通過Protein A親和色譜一步純化得到了高純度的抗人EGFR單克隆抗體。由BCA蛋白檢測測定得到樣品腹水中的抗體濃度是3.990 mg/mL。通過陰離子交換色譜與疏水相互作用色譜兩步純化得到高純度抗人EGFR單克隆抗體，由BCA蛋白檢測測定得到樣品腹水中的抗體濃度是2.340 mg/mL。通過陽離子交換色譜方法，9L的蛋清溶液(含雞蛋清3L)中純化得到7.486 g溶菌酶。通過陰離子交換色譜兩步純