高效液相色譜法在幾種中草藥中的應用研究.pdf

1、高效液相色譜法（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）是現(xiàn)代一種重要的新型分離分析技術，具有分離效能好、檢測靈敏度高、分析速度快、適用范圍廣和操作簡便等優(yōu)點。它是采用高壓輸液系統(tǒng)將流動相送入色譜柱中，各成分在柱內被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。目前，該方法已廣泛的應用于食品分析、環(huán)境監(jiān)測、生物工程、制藥工業(yè)等科學領域。
　　 中國是中草藥的發(fā)源地，中草藥中的有效成分

2、是預防治療疾病的物質基礎，其含量的多少已成為評估中藥質量的重要標志。近年來，隨著生活水平的不斷提高，使得人們“回歸自然”的要求日趨強烈，國內外學者對中藥中天然成分的研究提出了許多新方法新思路，現(xiàn)代的分析技術也在中藥研究中得到廣泛的應用。其中，高效液相色譜法(HPLC)是中藥質量分析最重要的手段之一。
　　 樣品前處理是色譜分析前的一個重要步驟，由于中藥是一個典型的復雜未知樣品，各成分的物理化學性質不同，含量相差大，因此，樣品前處

3、理技術的先進與否，往往是色譜分析成敗的關鍵。
　　 本文由緒論和研究報告兩部分組成。緒論部分簡單介紹了高效液相色譜法的特點和發(fā)展狀況、酚類化合物和樣品前處理技術的研究進展。研究報告部分建立了虎杖中白藜蘆醇的提取測定:高良姜中槲皮素、山奈酚、高良姜素的分離測定;小兒瀉速停顆粒中沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的分離測定;
　　 1、膠束萃取-高效液相色譜法測定虎杖中的白藜蘆醇
　　 以5％(w/v)的非離子表面活性劑Tr

4、itonX-100為萃取劑，建立了一種簡便綠色的膠束提取-高效液相色譜測定虎杖中的白藜蘆醇的方法。色譜柱為phenomenexC18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為甲醇-0.25％乙酸等度洗脫，流速0.8mL·min-1，檢測波長306nm。白藜蘆醇在0.04～200μg/mL，(r=0.9998)范圍內線性關系良好，定性檢測限(S/N=3)為9.46ng/mL，加入6％的NaCl來進行濁點富集，可提高萃取回收率，加標回收率

5、為94.47％。
　　 2、超聲提取-高效液相色譜法同時測定高良姜中的槲皮素、山奈酚、高良姜素
　　 建立基于非離子表面活性劑超聲提取-反相高效液相色譜法同時分離測定高良姜中槲皮素、山奈酚、高良姜素的方法。方法:采用phenomenexC18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm);流動相為乙腈-0.25％冰醋酸水溶液，采用梯度洗脫;流速1.0mL/min;檢測波長360nm。通過正交實驗確定最優(yōu)提取方案為:在40℃下，

6、100倍量的8％TritonX-100溶液超聲提取40min。結果:槲皮素、山奈酚和高良姜素分別在0.0076～76μg/mL,(r=0.9999);0.0064～64μg/mL,(r=1.0000);0.0152～152μg/mL，(=0.9999)范圍內線性關系良好，定性檢測限(S/N=3)依次為:7.32ng/mL，1.92ng/mL，1.13ng/mL;結論:該方法簡便快速、靈敏度高、成本低、綠色環(huán)保，適用于高良姜中黃酮類物質的

7、含量測定，為高良姜中黃酮化合物的的檢測及分離提供了一個有效的科學方法。
　　 3、膠束萃取-高效液相色譜法測定小兒瀉速停顆粒中的多酚類化合物
　　 建立了基于表面活性劑膠束萃取-反相高效液相色譜法同時分離測定小兒瀉速停顆粒中沒食子酸、兒茶素、表兒茶素的方法。方法:采用phenomenexC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動相為乙腈-0.2％冰醋酸水溶液，采用梯度洗脫;流速0.8mL/min;檢測波長280

8、nm?？疾炝松V條件，優(yōu)化了膠束萃取和濁點富集參數(shù)。結果:沒食子酸、兒茶素和表兒茶素分別在0.0104～223μg/mL，(r=0.9999);0.0152～108μg/mL，(r=0.9999);0.0184～132μg/mL，(r=0.9999)范圍內線性關系良好，定性檢測限(S/N)依次為:0.087ng/mL，0.43ng/mL，0.42ng/mL;在優(yōu)化條件:5％TritonX-100表面活性劑;固液比為1∶100(g/mL)