12063.持久饑餓對(duì)日本三角渦蟲細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、生化代謝和基因表達(dá)的影響

1、EFFECTSoFPROLoNGEDSTARVALTIONONTHECYTOMORPHOLOGY；METABLICCHANGEANDGENESEXPRESSIONINPLANARIANSD【廠G￡強(qiáng)己4J■PD、71：2IC么ADissertationSubmittedtot11eGraduateSchoolofHenanNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsforth

2、eDegreeofDoctorofPhilosophyinScienceByMaKexueSupervisor：ProfChenGuangwenApr20143差異RTPCR和差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選饑餓誘導(dǎo)日本三角渦蟲上調(diào)表達(dá)的基因和蛋白質(zhì)克隆和測序了一些受饑餓誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)的cDNA片段，發(fā)現(xiàn)了一些有價(jià)值的EST序列，這些EST序列涉及細(xì)胞代謝、細(xì)胞死亡、細(xì)胞應(yīng)激、蛋白質(zhì)水解酶、RNA結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞骨架類蛋白。實(shí)時(shí)熒光定量PC

3、R結(jié)果表明：DjHSP70、DjHSP90、DjHSP40和DjCl93A基因上調(diào)表達(dá)，而OjGeaZ8基因轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有明顯變化。利用2D電泳技術(shù)分離正常和饑餓渦蟲組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì)質(zhì)點(diǎn)，在饑餓渦蟲組織中分離出2000個(gè)質(zhì)點(diǎn)，差異質(zhì)點(diǎn)超過1000個(gè)。質(zhì)譜分析和NCBI數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果提示：部分上調(diào)表達(dá)的質(zhì)點(diǎn)分別歸屬于細(xì)胞應(yīng)激類、干細(xì)胞相關(guān)類、蛋白激酶類、膜泡運(yùn)輸類、抗氧化性蛋白類、受體類、轉(zhuǎn)錄因子類、細(xì)胞代謝類、表觀遺傳修飾類、細(xì)胞死亡

4、相關(guān)蛋白類和RNA結(jié)合蛋白類。其中，表達(dá)水平超過2倍的蛋白質(zhì)分別是HSP70／90、Piwi1蛋白、Vasa相關(guān)蛋白、Nanos相關(guān)蛋白、非受體絲／蘇氨酸激酶、非受體酪氨酸激酶和受體酪氨酸激酶、突觸相關(guān)蛋白、肌球蛋白重鏈、抗氧化酶6、細(xì)胞色素P450、SOD、G蛋白偶聯(lián)的受體激酶、HMG蛋白、氨肽酶、U62家族肽酶蛋白、絲氨酸蛋白水解酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶、磷酸甘油酸激酶、Caspase7、ATGl1和ATG4B。該工作為進(jìn)一步研究上調(diào)表達(dá)

5、基因和蛋白質(zhì)的功能奠定了良好的基礎(chǔ)。4。持久饑餓誘導(dǎo)日本三角渦蟲氧化和抗氧化性損傷反應(yīng)持久饑餓對(duì)脂質(zhì)過氧化的影響采用丙二醛(MDA)水平進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果表明，渦蟲饑餓30天后，MDA水平升高17倍，饑餓60天升高2倍，饑餓90天升高4倍。饑餓30天后抗氧化酶SOD活性升高50％，饑餓60天升高76％，饑餓90天升高123％。饑餓30天后CAT活性升高10％，饑餓6090天后升高20％。結(jié)果表明：持久饑餓導(dǎo)致氧化性損傷，抗氧化酶SOD和CA

6、T活性提高能保護(hù)細(xì)胞免受損傷。5日本三角渦蟲DjHSP90、DjGea78和DjHSP40基因克隆及生物信息學(xué)分析DjHSP90cDNA全長2354bp，包含2148bp的開放閱讀框(ORF)，編碼715個(gè)氨基酸，氨基酸序列上含有HSP90蛋白家族的5個(gè)標(biāo)簽序列。ORF區(qū)DNA測序表明，DjHSP90基因結(jié)構(gòu)區(qū)僅含有1個(gè)48bp內(nèi)含子。HSP90系統(tǒng)發(fā)生樹的基部是單細(xì)胞酵母，依次是植物、腔腸動(dòng)物、扁形動(dòng)物、軟體動(dòng)物、節(jié)肢動(dòng)物和脊椎動(dòng)物。