14299.豬體細胞轉(zhuǎn)入凝血細胞因子ⅸ和hfat1基因的研究

1、分類號——UDC學校代碼10126論文題目密級——編號——豬體細胞轉(zhuǎn)人凝血因子Ⅸ和hfat一1基因的研究THETRANSGENICRESEARCHESONPORCINESON【ATICCELLSⅥⅡTHmMANCOAGULATIONFACTORIXANDHFAT—lGENES研究生：指導教師：專業(yè)：研究方向：韓雪潔李榮鳳研究員李雪玲教授動物學生殖生物學與生物技術(shù)學院：生命科學學院二零一三年五月一苓一二平丑月韓雪潔豬體細胞轉(zhuǎn)人凝血因子Ⅸ和

2、hfat一1基因的研究豬體細胞轉(zhuǎn)人凝血因子|X和hfat一1基因的研究摘要豬在解剖學，神經(jīng)生物學、心臟血管、胃腸道和基因組方面與人相似，因此在研究人類疾病時，豬被認為是更好的動物模型，還可作為異種器官移植的供體。由于異種器官移植的深入研究，又將轉(zhuǎn)基因豬的研究推向一個新的高峰。本研究構(gòu)建兩種表達載體，并轉(zhuǎn)染細胞，獲得轉(zhuǎn)基因細胞，為生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因克隆豬做準備。1、人凝血因子Ⅸ基因和hfat1基因表達載體的構(gòu)建(1)從人胎兒肝臟中提取對峨并擴增出

3、入凝血因子Ⅸ(humancoagI；llationfactorⅨ，11FⅨ)cDNA序列，同時，PCR擴增出牛生長激素(BGH)polyA序列，將hFⅨ的cDNA序列與BGHpolyA序列分別連接到表達載體pbCSN2一RC的牛酪蛋白(CSN2)啟動子之后，構(gòu)建帶有新霉素抗性和紅色熒光蛋白雙篩選標記的乳腺特異性表達載體pbCSN2一hFⅨ一pAI匯。(2)改造pCAGDNA3，在砌I后面，CAGG啟動子前端添加覷I、BgI和艫I三個酶切