核因子-κB反義基因抑制腎系膜細(xì)胞炎性效應(yīng)的研究.pdf

1、_南京醫(yī)撇學(xué)碩士學(xué)位論文摘要腎小球固有細(xì)胞及局部浸潤的炎癥細(xì)胞所分泌的炎癥因子共同決定了腎小球腎炎的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。研究證實(shí)轉(zhuǎn)錄因子NFxB在腎小球系膜細(xì)胞活化、增殖和炎癥因子的產(chǎn)生中處于中心地位。因此。如何特異性阻斷NFxB活化以減輕腎臟炎性病變已成為人們研究的熱點(diǎn)。反義技術(shù)的興起，為特異性阻斷靶基因表達(dá)奠定了基礎(chǔ)，提示有可能應(yīng)用NFKB反義基因特異性阻斷NFxB的活化，從而降低炎性因子的分泌，減輕腎組織損傷。本研究應(yīng)用反義技術(shù)、體

2、外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及分子生物學(xué)技術(shù)(核酸酶保護(hù)法、Western印跡和RTPCR)，對以下三個(gè)方面的內(nèi)容進(jìn)行了研究，為利用NFxB反義基因類藥物治療腎小球炎性病變提供理論依據(jù)和技術(shù)基礎(chǔ)。爪第一觀察陽離子脂質(zhì)體對人腎小球系膜細(xì)胞攝取反義寡核營酸(ODN)的影響，并確定反義ODN轉(zhuǎn)染系膜細(xì)胞的最佳轉(zhuǎn)染效率，為反義ODN有效載體的選擇提供理論依據(jù)。第二、觀察NFKBp65亞基反義ODN對人腎小球系膜細(xì)胞炎癥介質(zhì)表達(dá)的影響，為利用NFKB反義ODN

3、類藥物治療腎小球炎性病變奠定基礎(chǔ)。第三、觀察NFKBp65亞基反義ODN對人腎小球系膜細(xì)胞p65mRNA及蛋白表達(dá)的影響，探討p65反義ODN的作用機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn):1.反義ODN轉(zhuǎn)染系膜細(xì)胞后可分布于胞漿及胞核內(nèi)。脂質(zhì)體介導(dǎo)的反義ODN大部分進(jìn)入胞核，而無脂質(zhì)體介導(dǎo)的反義ODN主要分布于胞漿。2無脂質(zhì)體介導(dǎo)組轉(zhuǎn)染系膜細(xì)胞6h后轉(zhuǎn)染效率為11.37%36h達(dá)到高峰(53.83%)。脂質(zhì)體介導(dǎo)組轉(zhuǎn)染6h攝取率為16.55%18h轉(zhuǎn)染效率己達(dá)

4、到高峰(95.85%)24h仍維持高峰平臺(tái)期(95.64%)。反義ODN對系膜細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率呈時(shí)間依賴性。3正常培養(yǎng)狀態(tài)下，系膜細(xì)胞組成型表達(dá)TNFa.IL1p、IL8和TGF邵mRNA，而不表達(dá)IL一獻(xiàn)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文ABSTRACTInflammatoryfactorssecretedbyrenalintrinsiccellsandinfiltratinginflammatorycellsactontheprogressiono

5、fglomerulonephritis.NFKBpromotestheexpressionofanumberofgenesinvolvedininflammationsuchascytokinesandadhesionmolecules.ClinicalandexperimentaldatasareconfirmingtheroleofactivatedNFKBinmesangialcellshypercellularityandinf

6、lammatoryfactorssecretion.ItisconceivablethatexogenousmodulationofNFxBactivationmayhelptodevisenewtherapeuticapproaches.BecauseofthespecificityofWatsonCrickbasepairingattemptsarenowbeingmadetouseoilgodeoxynucleotide(ODN)

7、inthetherapyofhumandisease.ThepotentialuseofODNasinhibitorsofgenesexpressionishighlighted.Inthisregardweperformedthestudyfromfollowingaspectsbymeansofantisensetechniquecellcultureinvitroandmolecularbiologytechniques.l.To

8、determinetheoptimaleffectofcationiclipidsonantisenseODN(ASODN)uptakeinhumanrenalmesangialcells.2.ToinvestigatetheblockingeffectsofNFxBp65subunitASODNontheproinflammatorycytokineschemokinesandprofibrogenticcytokinesexpres

9、sionofhumanmesangialcells(HMC)andtoprobethepotentialapplicabilityoftheASODNdruginrenalinflammatorydisorders.3.Toexploretheeffectsinp65ASODNonp65expressionofrenalmesangialcellsandthemechanismofinhibitionontargetgenesexpre