iASPP反義基因磁性納米顆粒的初步構(gòu)建及鑒定.pdf

1、背景和目的:
　　 胰腺癌是一種惡性度極高、預(yù)后極差的腫瘤。p53基因是與胰腺癌發(fā)生高度相關(guān)的抑癌基因，與之相關(guān)的p53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulatingprotein of p53，ASPP)是新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)蛋白家族.包括ASPP1、ASPP2和凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP，inhibitory member of the ASPP family)三個(gè)成員，其中iASPP是一種導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵癌蛋白

2、，能夠特異性抑制野生型p53誘導(dǎo)目的基因轉(zhuǎn)錄活化和促細(xì)胞凋亡功能。iASPP是p53最為保守的抑制蛋白，因此是一個(gè)非常理想的分子靶。
　　 本課題通過(guò)人工合成iASPP的反義基因，探討iASPP反義基因的穩(wěn)定性以及對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生物學(xué)影響；探討iASPP反義基因與磁性納米顆粒結(jié)合的可能性，并驗(yàn)證磁性納米顆粒對(duì)反義基因的保護(hù)作用以及在磁場(chǎng)中能夠定向移動(dòng)的特性。
　　 材料和方法:
　　 首先，通過(guò)基因工程的方法，人

3、工設(shè)計(jì)iASPP的反義基因，并使用DNA合成儀合成iASPP的反義基因。同時(shí)，培養(yǎng)胰腺癌細(xì)胞SW1990，進(jìn)行iASPP反義基因在SW1990培養(yǎng)液中穩(wěn)定性的研究以及對(duì)SW1990的增殖及凋亡的影響。其次，通過(guò)iASPP反義基因與構(gòu)建好的磁性納米顆粒進(jìn)行耦合，構(gòu)建iASPP反義基因磁性納米顆粒，并在電鏡下觀察磁性納米顆粒結(jié)合反義基因后的磁性納米顆粒的形態(tài)。最后，通過(guò)磁性納米顆粒能夠保護(hù)iASPP反義基因防止核酸酶的消化試驗(yàn)以及能夠在高磁

4、場(chǎng)中定向移動(dòng)的試驗(yàn)，來(lái)鑒定iASPP反義基因磁性納米顆粒特性。
　　 結(jié)果:
　　 人工合成的iASPP的反義基因，末端以硫代磷酸化修飾，在胰腺癌細(xì)胞SW1990培養(yǎng)液中至少3天是穩(wěn)定的，明顯抑制腫瘤細(xì)胞株的增殖，最高抑制率可高達(dá)91.16％。并通過(guò)觀察細(xì)胞周期可看到G0/G1期阻滯增加，S期減少，表明iASPP的反義核酸通過(guò)將細(xì)胞阻滯在G0/G1期，減少進(jìn)入S期的細(xì)胞數(shù)目，減少DNA復(fù)制，并導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡。這與p53

5、的抑癌作用相似。
　　 iASPP的反義基因能夠在與磁性納米顆粒各種質(zhì)量比的情況下都能較好的結(jié)合，電鏡下觀察可見磁性納米顆粒呈不規(guī)則形狀，中心為一鐵顆粒，直徑<100nm。在DNA保護(hù)試驗(yàn)中能夠很好保護(hù)反義基因抵御消化酶消化作用；并且能夠在磁場(chǎng)中進(jìn)行定向移動(dòng)，在施加磁場(chǎng)后的20分鐘后，反義基因納米顆粒定向移動(dòng)到高磁場(chǎng)區(qū)域。
　　 結(jié)論:
　　 1.人工合成的iASPP反義寡核苷酸，通過(guò)末端的硫代磷酸化修飾在胰腺癌