舌鱗癌淋巴道轉(zhuǎn)移中RECK基因的調(diào)控機制與板藍(lán)根組酸干預(yù)的實驗研究.pdf

1、目的：舌鱗癌淋巴道轉(zhuǎn)移是口腔惡性腫瘤的研究熱點之一，與臨床預(yù)后密切相關(guān)，其中基質(zhì)金屬蛋白酶家族在舌鱗癌侵襲、轉(zhuǎn)移中扮演重要角色，而RECK基因可以通過抑制MMP-2,9的活性阻礙、抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，構(gòu)成影響癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的調(diào)控體系。本研究利用臨床病理檢測結(jié)合淋巴道轉(zhuǎn)移動物模型，旨在分析RECK基因調(diào)節(jié)MMPs的相互關(guān)系，闡明RECK基因調(diào)節(jié)在舌鱗癌淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用及臨床意義；探討舌鱗癌轉(zhuǎn)移中RECK基因調(diào)控機制；在此基礎(chǔ)上，進一步開展板藍(lán)根

2、組酸抑制舌鱗癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的實驗研究與機理探討，尋找低毒、高效的癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移抑制劑，拓寬舌鱗癌的治療方法，提高治愈率。 方法：首先以舌鱗癌患者的臨床標(biāo)本與舌鱗癌淋巴道轉(zhuǎn)移動物模型為研究對象，采用免疫組化、WestemBlot技術(shù)，檢測RECK蛋白、MMP-2、9蛋白的表達(dá)水平，并通過統(tǒng)計學(xué)手段分析RECK基因表達(dá)與舌鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性以及和MMP-2、9基因的相互關(guān)系，繼而進行板藍(lán)根組酸抑制舌鱗癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的體內(nèi)、外實驗，采用Tr

3、answell培養(yǎng)體系進行板藍(lán)根組酸干預(yù)舌鱗癌細(xì)胞侵襲、趨化等轉(zhuǎn)移特性的檢測，應(yīng)用Western Blot與：Real-Time PCR技術(shù)檢測板藍(lán)根組酸干預(yù)后，舌鱗癌細(xì)胞RECK基因與MMP-2、9基因在mRNA和蛋白的表達(dá)水平。通過建立綠色熒光蛋白標(biāo)記舌鱗癌細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移的動物模型，進行板藍(lán)根組酸干預(yù)舌鱗癌轉(zhuǎn)移實驗，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測淋巴結(jié)中轉(zhuǎn)移的舌鱗癌細(xì)胞數(shù)，反映抑制效應(yīng)，同時進行Western Blot檢測RECK蛋白及MMP-

4、2、9蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果：舌鱗癌臨床標(biāo)本檢測，發(fā)現(xiàn)RECK蛋白表達(dá)水平與舌鱗癌的浸潤范圍、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，而且RECK蛋白表達(dá)水平與MMP-9表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān);動物模型體內(nèi)實驗，發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中舌鱗癌細(xì)胞的RECK蛋白表達(dá)水平顯著降低，而MMP-2、9蛋白水平明顯升高。經(jīng)板藍(lán)根組酸干預(yù)治療，可明顯抑制舌鱗癌細(xì)胞趨化運動和侵襲穿透能力，且具有濃度依賴性，同時還發(fā)現(xiàn)MMP-2、9在mRNA水平表達(dá)和蛋白分泌等方面均受到明

5、顯抑制，而RECK基因tuRNA與蛋白水平明顯上調(diào)；在舌鱗癌淋巴道轉(zhuǎn)移動物模型中，在板藍(lán)根組酸干預(yù)下，淋巴結(jié)中GFP陽性的標(biāo)記舌鱗癌細(xì)胞數(shù)量明顯下降，進一步發(fā)現(xiàn)該群細(xì)胞RECK蛋白水平回升與MMP-2、9表達(dá)水平明顯降低。 結(jié)論：舌鱗癌侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，RECK基因起到明顯的抑制作用，其抑制機理可能與下調(diào)MMP-2、MMP-9的表達(dá)有關(guān)。在體外、體內(nèi)實驗中，板藍(lán)根組酸可以抑制舌鱗癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力，并且與上調(diào)RECK蛋白表達(dá)