VEGF-D、VEGFR-3在舌鱗癌淋巴轉(zhuǎn)移中作用的研究.pdf

1、背景:
　　舌鱗癌是口腔頜面部常見的惡性腫瘤。臨床上具有生長快、浸潤性強(qiáng)、有較高的復(fù)發(fā)率、淋巴轉(zhuǎn)移率高、預(yù)后較差等特點(diǎn)。其在口腔鱗狀細(xì)胞癌中構(gòu)成比最高,我國約占32.3％,歐美國家報(bào)道在21％-52％之間。舌鱗癌為上皮源性腫瘤,具有較高的區(qū)域性淋巴轉(zhuǎn)移率,頸部區(qū)域淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移高達(dá)38.07％。研究表明在其仍為原位癌時(shí),在許多正負(fù)調(diào)控因子的相互作用下就開始了新生脈管的形成,供應(yīng)腫瘤生長所必需的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)。但至今舌鱗癌誘導(dǎo)淋巴管生

2、成的分子機(jī)制,以及其新生淋巴管與淋巴道轉(zhuǎn)移間的確切關(guān)系尚不甚明確。淋巴內(nèi)皮生長因子-D(VEGF-D)是血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)家族的一個(gè)成員,是近年來新發(fā)現(xiàn)的促淋巴管生長因子。VEGF-D在人類腫瘤中的表達(dá)及其意義研究結(jié)果不盡一致。VEGF-D必須和相應(yīng)的受體結(jié)合才能發(fā)揮其促進(jìn)微淋巴管生成的作用,VEGF-D/VEGFR-3與腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的關(guān)系,特別是在舌鱗癌中的作用尚待證實(shí)。以往對腫瘤淋巴管生成的研究因?yàn)槿狈α馨凸軆?nèi)皮細(xì)胞特異

3、性標(biāo)記物,僅依靠普通的HE染色技術(shù)很難將它們在形態(tài)學(xué)上與毛細(xì)血管截然區(qū)分,因此對腫瘤新生淋巴管生成的研究遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后于對腫瘤新生血管生成的研究。近年來,雖然淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體(LYVE-1)等一些淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物陸續(xù)被發(fā)現(xiàn),但多項(xiàng)研究證實(shí)這些常用標(biāo)記物不僅在淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá),而且在血管內(nèi)皮細(xì)胞中也有表達(dá),影響了在形態(tài)學(xué)上對腫瘤微淋巴管和腫瘤微血管的區(qū)分。1999年Marks等發(fā)現(xiàn)的D2-40分子,是一種可以和胚胎睪丸細(xì)胞膜及干細(xì)

4、胞膜表面的癌胚抗原M2A(一種分子量為40KD的0鏈唾液酸糖蛋白)發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的單克隆抗體。最新的研究發(fā)現(xiàn)D2—40在淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上有固定的抗原決定簇,可以用來標(biāo)識惡性黑色素瘤、前列腺癌、胃癌、腎細(xì)胞癌等多種腫瘤的新生微淋巴管,在有管壁平滑肌的成熟淋巴管和微血管內(nèi)皮上沒有表達(dá),因此成為一種新的淋巴管內(nèi)皮特異性標(biāo)記物。
　　目的:
　　探討舌鱗癌組織中VEGF-D(淋巴管內(nèi)皮生長因子-D)及其受體VEGFR-3(血管內(nèi)

5、皮生長因子受體-3)的表達(dá)。采用D2—40標(biāo)記舌鱗癌組織中的淋巴管并計(jì)數(shù)腫瘤淋巴管密度(LVD)。分析VEGF-D、VEGFR-3與舌鱗癌中淋巴管生成、分布、密度及相關(guān)臨床病理因素之間的關(guān)系。推斷VEGF-D/VEGFR-3/LVD在舌鱗癌淋巴轉(zhuǎn)移中的作用。
　　材料和方法：
　　標(biāo)本來源,實(shí)驗(yàn)組為2005~2006年鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔頜面外科舌鱗癌患者術(shù)后標(biāo)本69例(所有患者均術(shù)前未行放療和化療,術(shù)后正規(guī)治療);對照

6、組為正常舌黏膜組織標(biāo)本20例。所取組織均經(jīng)10％福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋,5μm連續(xù)切片,進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。采用免疫組織化學(xué)法,檢測舌鱗癌患者手術(shù)切除標(biāo)本中VEGF-D、VEGFR-3和D2-40的表達(dá)情況。
　　統(tǒng)計(jì)方法:
　　采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,α=0.05。其中VEGF-D和VEGFR-3的表達(dá)以及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系采用卡方檢驗(yàn),LVD與VEGF-D、VEGFR-3的表達(dá)以及與臨床病理參

7、數(shù)之間的關(guān)系采用t檢驗(yàn)及F檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　　1、VEGF-D的免疫組化結(jié)果:正常舌黏膜存在少量VEGF-D表達(dá),主要位于上皮細(xì)胞胞漿。陽性3例(陽性率為15.00％)。舌鱗癌組織中VEGF-D表達(dá)主要位于腫瘤細(xì)胞的胞漿。陽性30例(陽性率為43.48％),與對照組相比有顯著性差異(P<0.05)。37例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中,VEGF-D陽性22例(陽性率59.46％),32例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中VEGF-D陽性8例(陽性率25.

8、00％),二者差異顯著(P<0.05)。VEGF-D的表達(dá)與年齡、腫瘤大小、病理分型無關(guān)(P>0.05)。
　　2、VEGFR-3的免疫組化結(jié)果:VEGFR-3在正常組織中有4例表達(dá)陽性(陽性率為20.00％)。舌鱗癌中VEGFR-3表達(dá)位于腫瘤周圍淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞,在腫瘤細(xì)胞胞漿中也有陽性表達(dá),但其在腫瘤組織的表達(dá)主要集中在腫瘤外周。在舌鱗癌中有44例呈陽性表達(dá)(陽性率為63.77％)。37例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中,VEGFR-3陽性30

9、例(陽性率81.08％),32例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中VEGFR-3陽性14例(陽性率43.75％),二者差異顯著(P<0.05)。腫瘤細(xì)胞VEGFR—3的陽性表達(dá)和VEGF-D陽性表達(dá)之間有顯著的相關(guān)性(P<0.05)。與淋巴轉(zhuǎn)移也具有顯著相關(guān)性。
　　3、D2-40的免疫組化結(jié)果:正常黏膜的D2-40陽性染色的淋巴管很少且散在分布,計(jì)數(shù)微淋巴管密度值為6.23±0.23。光鏡下見舌鱗癌組織中D2-40陽性染色的淋巴管大部分位于腫瘤間

10、質(zhì)組織內(nèi),在腫瘤組織內(nèi)部也有少量淋巴管。特征為管壁薄,管腔大小不一,形態(tài)不規(guī)則,舌鱗癌中淋巴管密度為33.24±0.09。兩者差異顯著(P<0.05)。非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組淋巴管密度為27.56±0.05。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組淋巴管密度為38.15±0.35。兩者差異顯著(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、VEGF-D在正常組織中低表達(dá),在舌鱗癌中高表達(dá),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。與年齡、腫瘤大小、病理分型無關(guān)。
　　2、VEGFR-3

11、在正常組織或舌鱗癌組織中都有表達(dá),但在舌鱗癌中高表達(dá)。其高表達(dá)和腫瘤細(xì)胞中VEGF-D的陽性表達(dá)有顯著的相關(guān)性(P<0.05),和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也具有顯著的相關(guān)性(P<0.05)。
　　3、正常舌黏膜組織和舌鱗狀細(xì)胞癌組織中均可見D2-40陽性表達(dá)的淋巴管,但舌鱗狀細(xì)胞癌組織中淋巴管密度明顯高于正常黏膜組織。說明舌鱗狀細(xì)胞癌組織中具有更豐富的淋巴管,但分布存在異質(zhì)性。淋巴管主要分布于腫瘤間質(zhì)組織內(nèi)、管壁薄、管腔大小不一、形態(tài)不規(guī)則。腫

12、瘤淋巴管密度(LVD)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等相關(guān),其LVD的增加可能與舌癌的侵襲及轉(zhuǎn)移相關(guān)。
　　4、由以上可以推測,VEGF-D/VEGFR-3可促進(jìn)腫瘤淋巴管生成,是腫瘤經(jīng)淋巴道侵襲轉(zhuǎn)移的重要調(diào)控系統(tǒng)之一,淋巴管數(shù)目的增多使癌細(xì)胞更易于侵入淋巴管從而促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致生存期縮短。舌鱗癌組織中的VEGF-D/VEGFR-3/LVD聯(lián)合檢測可作為評估舌鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的一項(xiàng)輔助指標(biāo),并為舌癌患者判斷預(yù)后及確定臨床治療方案提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)