周期序貫聯(lián)合免疫抑制劑治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡動物模型的實驗研究.pdf

1、目的:為了從臨床實踐上升到理論認識的高度，本文探討周期序貫聯(lián)合免疫抑制劑(長春新堿、環(huán)磷酰胺)治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡動物模型的實驗研究，以闡明序貫聯(lián)合用藥協(xié)同效應機制。 方法:本研究分兩部分進行： 第一部分：系統(tǒng)性紅斑狼瘡動物模型的選擇和建立 動物模型選取慢性移植物抗宿主病狼瘡樣小鼠模型，實驗動物取6-8周齡雌性(C57BL/6J×DBA/2)F1雜交鼠及6-8周齡雌性DBA/2小鼠，體重(18-20)g。制作慢性移

2、植物抗宿主病(cGVHD)狼瘡樣小鼠模型36只。造模前及造模6周時分別留取血尿檢測尿蛋白定量、血肌酐、血抗雙鏈DNA抗體并各處死解剖小鼠3只，剩余30只小鼠模型進入第二部分研究。 第二部分：VCR+CTX周期聯(lián)合治療SLE動物模型的實驗研究選取慢性移植物抗宿主病狼瘡樣小鼠模型30只，隨機分五組：空白對照組、VCR間歇給藥組、CTX間歇給藥組、CTX隔日給藥組及VCR+CTX聯(lián)合間歇給藥組。間歇給藥為每隔三周(20天)給予一次，隔

3、日給藥為每隔一天給予一次。從誘導開始到全部處死動物，歷時24周。 檢測項目： 1.一般情況，包括體重、精神狀態(tài)、存活。 2.血液檢測外周血白細胞、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血清肌酐、血清雙鏈DNA抗體、ELISA檢測血TGF-β1、血MCP1、血BAFF。 3.尿液檢測24小時尿蛋白定量、尿TGF-β1、尿MCP1。 4.肝臟病理肝臟病理切片(HE染色)。 5.腎臟病理腎臟病理切片(HE染色、Mas

4、son染色、PSAM染色、免疫熒光染色C3及IgG)免疫組織化學法定位測定TGF-β1、MCP1。 6.半定量RT-PCR.測定TGF-β1、MCP1的mRNA在腎臟的表達。 7.脾臟病理免疫組化法定位測定BAFF、BAFFR。 8.半定量RT-PCR測定BAFF、BAFFR的mRNA在脾臟的表達。 統(tǒng)計采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件，進行重復測量方差分析、相關(guān)分析、析因分析等。 結(jié)論: 1

5、.慢性移植物抗宿主病狼瘡樣小鼠模型可出現(xiàn)狼瘡腎炎Ⅳ型病理改變及MCP-1、TGFβ1、BAFF的表達排泌增加。 2.序貫周期聯(lián)合VCR和CTX聯(lián)合治療有交互作用，在降低24小時尿蛋白定量，血清肌酐，血清BAFF，減少腎臟MCP-1的表達和排泌等方面為協(xié)同作用，與CTX隔日用藥組相當，優(yōu)于VCR間隔治療組、CTX間隔治療組。 3.VCR+CTX聯(lián)合間歇給藥與單用藥比較不良反應并沒有增加，比較安全。CTX隔日給藥組的不良反應