人牙囊細(xì)胞克隆分選及其分化功能的相關(guān)研究.pdf

1、牙周病治療的目標(biāo)是促使受損組織不同程度的修復(fù)和再生，如何獲得牙周組織結(jié)構(gòu)和功能的完全性再生，一直是國(guó)內(nèi)外學(xué)者追求的目標(biāo)和研究的方向。近年來(lái)，牙周組織再生的研究取得了重要進(jìn)展。理想的牙周組織再生，應(yīng)同時(shí)包括牙骨質(zhì)、牙周膜和牙槽骨的再生。其關(guān)鍵是選擇合適的干細(xì)胞作為牙周組織工程的種子細(xì)胞。
　　牙囊起源于外胚間充質(zhì)，是包繞在成釉器周?chē)氖杷山Y(jié)締組織，在牙齒發(fā)育后期和牙齒的萌出中均發(fā)揮著重要作用，是形成牙周組織的唯一器官。牙囊細(xì)胞在牙周

2、組織分化發(fā)育中的特點(diǎn)，使其成為一種值得考慮的種子細(xì)胞。牙囊細(xì)胞是牙周組織發(fā)育的直接前體細(xì)胞，成纖維細(xì)胞、成牙骨質(zhì)細(xì)胞以及成骨細(xì)胞都由其分化而來(lái)，在牙齒發(fā)育后期形成牙周膜、牙骨質(zhì)及固有牙槽骨。牙囊細(xì)胞具有形成牙周組織各部分的能力，能夠在短時(shí)間內(nèi)向多個(gè)方向分化，這可能與牙囊細(xì)胞自身生物學(xué)特性有關(guān)。牙囊細(xì)胞為一類(lèi)異質(zhì)性細(xì)胞群，可能含有牙周發(fā)育的前體細(xì)胞成分，具有向特定方向分化的能力。此外，牙囊細(xì)胞在臨床上取材方便，可以從丟棄的牙囊組織中獲得。

3、以上均提示牙囊細(xì)胞可以作為候選種子細(xì)胞應(yīng)用于牙周組織工程。因此，本研究從牙囊細(xì)胞的生物學(xué)特性及分化特點(diǎn)等方面著手進(jìn)行研究，通過(guò)篩選單細(xì)胞衍生的牙囊細(xì)胞克隆并對(duì)其進(jìn)行克隆表型分析，更深入地認(rèn)識(shí)這種存在于牙周發(fā)育時(shí)期的前體細(xì)胞，探討其作為種子細(xì)胞應(yīng)用于牙周組織工程的可行性，指導(dǎo)以牙囊細(xì)胞為種子細(xì)胞的牙周組織再生工程的構(gòu)建，為今后的實(shí)驗(yàn)研究以及臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　課題研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　第一部分：牙囊干細(xì)胞的分離和

4、生物學(xué)特性研究
　　目的：驗(yàn)證牙囊干細(xì)胞作為牙周組織工程種子細(xì)胞的可行性。方法：本實(shí)驗(yàn)分離培養(yǎng)了人牙囊干細(xì)胞，行體外生物學(xué)特性檢測(cè)，并以人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為對(duì)照，進(jìn)行干細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)性狀比較。結(jié)果：兩種細(xì)胞均為成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞群，牙囊細(xì)胞胞體稍短，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞胞體則較為細(xì)長(zhǎng)；兩種細(xì)胞的CD34、CD45（造血系細(xì)胞標(biāo)志）表達(dá)均呈陰性；CD29、CD44、CD90、CD105（間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志）均呈高表達(dá)；相對(duì)于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，

5、牙囊干細(xì)胞的Stro-1（間充質(zhì)干細(xì)胞特異性標(biāo)志物，在未分化細(xì)胞群中高表達(dá)）表達(dá)、增值活性及克隆形成率均較高；成骨向分化能力沒(méi)有顯著性差異；成脂向分化能力較低。結(jié)論：牙囊干細(xì)胞同骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞一樣，在體外均呈現(xiàn)較強(qiáng)的干細(xì)胞特性-增殖活性、克隆形成能力、多向分化能力；兩者均來(lái)自外胚間充質(zhì)細(xì)胞；相對(duì)于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，牙囊干細(xì)胞中含有更多的未分化細(xì)胞。牙囊干細(xì)胞可以作為優(yōu)選種子細(xì)胞應(yīng)用于牙周再生組織工程。
　　第二部分：牙囊細(xì)胞異質(zhì)

6、性研究
　　目的：研究牙囊細(xì)胞異質(zhì)性。方法：采用有限稀釋鋪板法篩選單細(xì)胞衍生的牙囊細(xì)胞克隆，通過(guò)克隆表型分析，觀察不同克隆表型牙囊細(xì)胞的生物學(xué)特性及其牙周組織再生能力。結(jié)果：通過(guò)有限稀釋方法可以獲得單細(xì)胞衍生的牙囊細(xì)胞克?。徊煌寺”硇椭g的生物學(xué)特性存在較大差異；根據(jù)各個(gè)克隆的表型分析大致可以分為未分化型、成纖維型和成骨/牙骨質(zhì)型三種表型，并相應(yīng)在體內(nèi)異位形成特有的結(jié)構(gòu)。結(jié)論：牙囊細(xì)胞為異質(zhì)性細(xì)胞群，不同表型的牙囊細(xì)胞克隆具有形