成人毛囊器官培養(yǎng)、干細(xì)胞分選及其增殖分化調(diào)控的研究.pdf

1、該研究首先通過毛囊體外器官型培養(yǎng)的模型探討了敏樂定在毛囊周期中的作用以及可能機(jī)制.將從正常人頭皮皮下層拔出的毛囊置于無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng),生長狀況良好,并且不可控制的因素較少,可保證實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性.該研究中還發(fā)現(xiàn)經(jīng)培養(yǎng)7天后毛囊β1整合素和K19表達(dá)均降低.說明在培養(yǎng)過程中干細(xì)胞的減少.敏樂定對(duì)β1整合素和K19的表達(dá)沒有明顯的影響,因此它對(duì)毛囊生長的促進(jìn)作用可能與β1整合數(shù)和K19的關(guān)系并不密切.其次,該研究首次建立了快速粘附法分選毛囊干

2、細(xì)胞的方法,并借此探討了β-catenin信號(hào)分子在毛囊干細(xì)胞的增殖分化調(diào)節(jié)中的作用以及可能的信號(hào)途徑.利用干細(xì)胞粘附能力強(qiáng)的特點(diǎn),將毛囊細(xì)胞懸液接種于包被有人膠原的平板中,對(duì)不同時(shí)間內(nèi)粘附上的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè).為了觀察經(jīng)粘附分選后毛囊細(xì)胞β-catenin的表達(dá)情況,該研究利用免疫細(xì)胞化學(xué)和原位雜交的方法從蛋白質(zhì)和m RNA水平進(jìn)行了檢測(cè).結(jié)果顯示,快速粘附細(xì)胞核中β-catenin蛋白水平有所增加,提示β-catenin蛋白參與了干細(xì)胞

3、增殖的調(diào)控.而mRNA則沒有顯著改變的原因在于,細(xì)胞內(nèi)β-catenin蛋白的分布與含量的調(diào)節(jié)主要是通過對(duì)β-catenin蛋白的穩(wěn)定性進(jìn)行調(diào)節(jié)而實(shí)現(xiàn)的.為了進(jìn)一步探討β-catenin的作用及其機(jī)制,該研究利用含有氨基端突變的β-catenin的表達(dá)質(zhì)粒對(duì)未經(jīng)分選的毛囊細(xì)胞進(jìn)行了β-catenin基因轉(zhuǎn)染.結(jié)果發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染后的毛囊細(xì)胞核內(nèi)β-catenin表達(dá)增高.轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆形成率明顯增加,其中大克隆的增加并不明顯.K19的表達(dá)雖有增

4、加但程度也較低.提示毛囊細(xì)胞核內(nèi)β-catenin的增加促進(jìn)了細(xì)胞的分裂增殖,但并沒有使干細(xì)胞增加,更可能是促進(jìn)了干細(xì)胞的分裂分化.與既往的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果相符,進(jìn)一步說明了β-catenin對(duì)干細(xì)胞的增殖與分化的促進(jìn)作用.為了了解β-catenin促進(jìn)細(xì)胞增殖分化作用的分子機(jī)制,該研究利用Western Blot以及原位雜交的方法檢測(cè)了β-catenin作為轉(zhuǎn)錄因子所調(diào)節(jié)的目的基因c-myc基因的表達(dá)情況.結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染突變的β-cate

5、nin 后毛囊細(xì)胞c-Myc蛋白表達(dá)量明顯增加,mRNA水平也同樣增加,提示β-catenin 的增加促進(jìn)了c-myc基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄與翻譯,從而推論出β-catenin 對(duì)毛囊細(xì)胞增殖分化的促進(jìn)作用是通過促進(jìn)c-myc基因的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的.總之,該研究利用毛囊器官培養(yǎng)的模型證實(shí)了敏樂定對(duì)毛囊生長的促進(jìn)作用,首次觀察到了它在此模型中對(duì)膠原代謝的影響,它的作用機(jī)制可能是通過抑制TGFβ1的過度表達(dá)而延緩毛囊退化期的出現(xiàn),從而相對(duì)延長了毛的生長期