雄激素誘導(dǎo)毛囊干細(xì)胞內(nèi)皮脂腺細(xì)胞分化的初步研究.pdf

1、毛囊隆突區(qū)(bulge region)是毛囊干細(xì)胞的主要棲息地，最近實驗證實隆突區(qū)干細(xì)胞不僅能遷移產(chǎn)生皮脂腺和表皮，而且能遷移產(chǎn)生新的毛囊。 皮脂腺細(xì)胞的生長和分化受視黃醛衍生物(retinoid)、激素(hormones)和細(xì)胞因子(cytokines)的調(diào)控。雄激素對皮脂腺細(xì)胞的發(fā)育成熟以及皮脂的合成分泌具促進作用。雄激素受體是一種配體依賴性的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白，參與雄激素激發(fā)的各種生理功能的調(diào)節(jié)。據(jù)文獻報道，在人的皮脂腺(seb

2、aceous gland,SG)的基底層和毛囊外根鞘(outer rootsheath，ORS)中均有雄激素受體的表達。 為了探索雄激素對毛囊干細(xì)胞定向分化為皮脂腺細(xì)胞的過程是否具有促進功能，我們進行了如下的實驗來進行研究： 第一步，檢測了在毛囊周期的三個不同時期(生長期、退化期和靜止期)中大鼠觸須毛囊干細(xì)胞中AR、ARmRNA的表達以及檢測原代培養(yǎng)的毛囊干細(xì)胞中AR的表達并探討意義，為進一步研究打下基礎(chǔ)。 第二

3、步，在體外培養(yǎng)毛囊干細(xì)胞并檢測了AR、K15、CD34以及β1-integrin的表達。 第三步，將培養(yǎng)細(xì)胞分成誘導(dǎo)組和對照組： ①誘導(dǎo)組細(xì)胞：改用添加了雄激素的誘導(dǎo)培養(yǎng)基來培養(yǎng)，以此誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的毛囊干細(xì)胞向皮脂腺細(xì)胞的定向分化，檢測上皮膜抗原(epithelial membrane antigen，EMA)和脂滴在誘導(dǎo)細(xì)胞中的表達； ②對照組細(xì)胞：作對照，仍繼續(xù)用未添加雄激素的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，檢測上皮膜抗原(

4、epithelial membrane antigen，EMlA)和脂滴在對照細(xì)胞中的表達。 方法： 采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測AR、K15、CD34、β1-integrin以及EMA的表達。采用油紅O組織化學(xué)染色技術(shù)檢測脂滴的形成情況。采用RT-PCR檢測AR mRNA的表達。在體外用添加了雄激素的培養(yǎng)基來誘導(dǎo)毛囊干細(xì)胞向皮脂腺細(xì)胞定向分化。 結(jié)果： 1．在體情況下，生長期、退化期和靜止期大鼠觸須毛囊干細(xì)

5、胞中均有AR表達。 2．AR在生長期呈強表達，而在退化期和靜止期表達微弱；AR mRNA在生長期呈強表達，而在退化期和靜止期表達微弱；AR表達變化趨勢與AR mRNA表達變化趨勢一致。AR表達變化趨勢與毛囊干細(xì)胞的增殖分化能力呈一致性。 3．體外情況下，培養(yǎng)的毛囊干細(xì)胞中有AR、K15、CD34和β1-integrin的表達。 4．用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測到誘導(dǎo)后的細(xì)胞中EMA的表達呈陽性，而未經(jīng)誘導(dǎo)處理的細(xì)胞表達呈陰

6、性；用油紅O染色檢測到誘導(dǎo)后的細(xì)胞中有脂滴的形成，而在未經(jīng)誘導(dǎo)的細(xì)胞中沒有脂滴的形成。 結(jié)論： 1．大鼠觸須毛囊隆突區(qū)在整個毛囊周期中均有AR表達，是雄激素作用的靶組織。體外培養(yǎng)的毛囊干細(xì)胞亦是AR靶細(xì)胞并能較好地保持了其干細(xì)胞性。 2．AR和AR mRNA在毛囊周期中呈規(guī)律性表達，AR表達變化趨勢與AR mRNA表達變化趨勢一致。AR表達變化趨勢與毛囊干細(xì)胞的增殖分化能力呈一致性。 3．用免疫細(xì)胞化學(xué)檢