芳香烴受體及相關(guān)基因在人皮脂腺細(xì)胞上表達(dá)及其意義的研究.pdf

1、現(xiàn)代工業(yè)的飛速發(fā)展,給人類社會(huì)帶來(lái)了空前的進(jìn)步,但是由此產(chǎn)生的廢物也使人類付出了巨大的健康代價(jià)。二噁英是工業(yè)生產(chǎn)中的副產(chǎn)物,目前被認(rèn)為是環(huán)境污染物的代表。作為多氯代二苯-對(duì)-二噁英(polychlorinateddibenzo-p-dioxins)類化合物的簡(jiǎn)稱,二噁英大約有75種異構(gòu)體,其中2,3,7,8-四氯二苯并對(duì)二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)是代表性化合物,目前研究證實(shí)

2、其具有生殖毒性、致癌性、免疫毒性、內(nèi)分泌毒性及皮膚毒性等毒理學(xué)作用,對(duì)人體的健康產(chǎn)生了深遠(yuǎn)的影響,因此研究TCDD對(duì)人體的毒性作用受到國(guó)際社會(huì)和醫(yī)學(xué)界的高度重視。
　　氯痤瘡是一種以粉刺和囊腫為主要表現(xiàn)的好發(fā)于面部的毛囊皮脂腺單位的痤瘡亞型,也是二噁英中毒最敏感和最可靠的標(biāo)志。目前氯痤瘡發(fā)病的分子機(jī)制尚不明確,與尋常痤瘡不同是氯痤瘡以皮脂腺萎縮和脂質(zhì)分泌減少為主要的臨床特征,其組織病理學(xué)表現(xiàn)為:毛囊漏斗部及皮脂腺導(dǎo)管增生和角化過(guò)度

3、,導(dǎo)致粉刺和小囊腫形成、毛囊結(jié)構(gòu)消失,皮脂腺及汗腺萎縮并被角化表皮細(xì)胞取代。因此,闡明二噁英與皮脂腺分化及脂質(zhì)合成的關(guān)系對(duì)揭示氯痤瘡的發(fā)病機(jī)制有重要意義。課題組先前的研究在國(guó)際上首次體外證明了二噁英通過(guò)激活芳香烴受體(arylhydrocarbonreceptor,AhR)誘導(dǎo)了人皮脂腺細(xì)胞系向角質(zhì)形成細(xì)胞系的轉(zhuǎn)化是氯痤瘡發(fā)生重要機(jī)制。我們?cè)诖嘶A(chǔ)上進(jìn)一步研究TCDD通過(guò)何種信號(hào)分子途徑誘導(dǎo)了皮脂腺細(xì)胞的異常分化。
　　二噁英的細(xì)

4、胞毒性效應(yīng)大部分是通過(guò)AhR信號(hào)途徑介導(dǎo)的,作為AhR的配體,芳香烴受體核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Ahreceptornucleartranslocatorprotein,ARNT)與AhR形成AhR/ARNT異二聚體后,激活了下游靶位基因。然而AhR的下游靶位基因眾多,其中細(xì)胞色素P4501A1(CytochromeP4501A1,CYP1A1)在許多細(xì)胞上被認(rèn)為是AhR信號(hào)途徑經(jīng)典下游靶位基因;而近年來(lái)B-淋巴細(xì)胞終極分化的主調(diào)控子(Blymph

5、ocyte-inducedmaturationprotein1,Blimp1)又作為AhR非經(jīng)典信號(hào)途徑的一個(gè)新的靶基因受到關(guān)注。因此,我們推測(cè)TCDD是通過(guò)AhR/ARNT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,激活了下游靶位基因CYP1A1、Blimp1的表達(dá),介導(dǎo)了人皮脂腺的異常分化。
　　目的
　　采用體外培養(yǎng)的永生化SZ95人皮脂腺細(xì)胞以及體外培養(yǎng)的人活體皮膚組織為研究模型,研究AhR、ARNT、CYP1A1和Blimp1蛋白在體外培養(yǎng)的人

6、SZ95皮脂腺細(xì)胞和人皮膚組織中表達(dá)的情況并在TCDD的作用后檢測(cè)上述基因表達(dá)的變化情況。初步探討TCDD細(xì)胞毒性的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制以及TCDD激活的下游靶位基因。為揭示二噁英影響人皮脂腺細(xì)胞異常分化的細(xì)胞內(nèi)分子信號(hào)途徑及氯痤瘡發(fā)生的分子機(jī)制提供進(jìn)一步證據(jù)。
　　方法
　　①細(xì)胞免疫組化法檢測(cè)SZ95人皮脂腺細(xì)胞中AhR、ARNT、CYP1A1、Blimp1蛋白表達(dá)情況及在10nMTCDD作用3d后上述基因的表達(dá)變化情況;

7、>　?、诘鞍子≯E法檢測(cè)SZ95人皮脂腺細(xì)胞中AhR、ARNT、CYP1A1、Blimp1蛋白表達(dá)情況及在10nMTCDD作用3d后上述基因的表達(dá)變化情況;
　?、勖庖呓M化法檢測(cè)人面部皮脂腺組織中AhR、ARNT、CYP1A1、Blimp1蛋白表達(dá)情況及在10nMTCDD作用3d后上述基因的表達(dá)變化情況;
　?、芷つw組織HE染色法研究10nMTCDD作用前后人面部皮脂腺組織7d后皮脂腺組織的形態(tài)學(xué)變化情況。
　　結(jié)果：<

8、br>　　①細(xì)胞免疫組化法顯示AhR蛋白主要表達(dá)于SZ95人皮脂腺細(xì)胞胞漿中,ARNT蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi),CYP1A1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞胞漿中,Blimp1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞胞核內(nèi);在10nMTCDD作用3d后,SZ95人皮脂腺細(xì)胞中AhR蛋白的表達(dá)下降,ARNT蛋白的表達(dá)升高,CYP1A1蛋白的表達(dá)升高,Blimp1蛋白的表達(dá)升高;
　?、诘鞍子≯E法顯示在10nMTCDD作用3d后,SZ95人皮脂腺細(xì)胞內(nèi)AhR蛋白相對(duì)定量值

9、(0.153±0.025)與未加藥的陰性對(duì)照組(0.343±0.021)相比較,實(shí)驗(yàn)組中AhR蛋白的表達(dá)降低;ARNT蛋白相對(duì)定量值(2.090±0.362)與未加藥的陰性對(duì)照組(0.997±0.156)相比較,實(shí)驗(yàn)組中ARNT蛋白的表達(dá)升高;CYP1A1蛋白相對(duì)定量值(4.233±0.252)與未加藥的陰性對(duì)照組(0.123±0.208)相比較,實(shí)驗(yàn)組中CYP1A1蛋白表達(dá)明顯升高;Blimp1蛋白相對(duì)定量值(2.930±0.058)

10、與未加藥的陰性對(duì)照組(0.440±0.036)相比較,實(shí)驗(yàn)組中Blimp1蛋白的表達(dá)明顯升高。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　③免疫組化法顯示人面部皮脂腺組織中AhR、ARNT、CYP1A1、Blimp1蛋白均有表達(dá),在10nMTCDD作用3d后,SZ95人皮脂腺細(xì)胞中AhR蛋白的表達(dá)下降,ARNT蛋白的表達(dá)升高,CYP1A1蛋白的表達(dá)升高,Blimp1蛋白的表達(dá)升高;
　?、芷つw組織HE染色法顯示在10nMTCD

11、D作用人面部皮膚組織7d后,發(fā)現(xiàn)人皮脂腺組織周邊出現(xiàn)角質(zhì)形成樣細(xì)胞,皮脂腺組織明顯縮小。
　　結(jié)論
　　AhR、ARNT、CYP1A1、Blimp1蛋白在SZ95人皮脂腺細(xì)胞和人頭面部皮膚組織中均有表達(dá),在TCDD作用下表達(dá)發(fā)生變化,在體外初步證明了二噁英誘導(dǎo)人皮脂腺細(xì)胞異常分化可能通過(guò)了AhR/ARNT途徑,CYP1A1、Blimp1可能作為下游靶位基因參與了人皮脂腺的異常分化,并在氯痤瘡發(fā)生的分子機(jī)制中發(fā)揮了重要的作用。