細(xì)胞分化相關(guān)基因胚胎肝細(xì)胞分化因子-15(ELDF-15)真核細(xì)胞表達(dá)載體的構(gòu)建及功能的初步研究.pdf

1、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文細(xì)胞分化相關(guān)基因胚胎肝細(xì)胞分化因子—15（ELDF15）真核細(xì)胞表達(dá)載體的構(gòu)建及功能的初步研究姓名：劉艷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：張世馥2003.1.1中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2NCBIGenBankdatabase檢索結(jié)果表明：ELDF保留了完整的3’端信號(hào)傳導(dǎo)序列和部分編碼序列。我們將其在GenBank進(jìn)行注冊(cè)，注冊(cè)號(hào)為AF394227。同源性分析比較結(jié)果表明：與8種基因有高度的同源

2、性。其中ELDFl5的eDNA與人源性AT2受體相關(guān)蛋白1(ATIPl)基因同源性高達(dá)100％。迄今，有關(guān)ATIPl的功能?chē)?guó)際、國(guó)內(nèi)尚未報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)ELDFl5功能進(jìn)行初步探討。以ELDFl5eDNA為探針，利用NorthernBlot和間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)對(duì)該片段進(jìn)行組織和細(xì)胞種屬特異性表達(dá)及定位的研究。結(jié)果顯示：在人胎兒骨髓，睪丸、肌肉、腎臟、肝、脾、胃、心、腦、肺10種組織中表達(dá)較強(qiáng)，其中它在腎、骨髓、肝、脾、心臟、肺組織中表達(dá)明

3、顯高于睪丸、肌肉、胃、腦組織。在I臨床病理腫瘤組織如：以在組織中恒定表達(dá)的GAPDH為對(duì)照，ELDFl5在幾種癌組織中如：子宮癌、膽囊癌、胃癌、肝癌均表達(dá)增強(qiáng)，但在相應(yīng)癌旁組織中，ELDFl5的表達(dá)明顯低于癌組織。同樣，我們利用幾種人腫瘤細(xì)胞系如：人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞(HD)、人肺腺癌細(xì)胞(HAC)、人肝癌細(xì)胞(Bel)、人肺低轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞(L—c)、小細(xì)胞肺癌(295)，人紅白血病細(xì)胞(K。)進(jìn)行雜交，結(jié)果顯示均高表達(dá)。另外，我們分析

4、了ELDFl5在正常小鼠腎、血、肝、脾、骨髓、腦、心組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示ELDFl5在所有小鼠組織中低表達(dá)。間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ELDFl5片段定位在細(xì)胞膜。根據(jù)以上結(jié)果：ELDFl5在低分化程度的胚胎組織，腫瘤組織及腫瘤細(xì)胞系中高表達(dá)；而在分化成熟的正常組織中和癌旁組織中，則表達(dá)較低的現(xiàn)象，提示ELDFl5基因可能與細(xì)胞分化、增殖和個(gè)體發(fā)育以及腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。由此。我們?cè)O(shè)想，可否利用反義技術(shù)，將重組的反義ELDFl5基因片段