生殖支原體LAMPs誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生前炎癥性細(xì)胞因子的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路.pdf

1、目的： 本研究試圖探討生殖支原體(Mg)脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白(LAMPs)能否誘導(dǎo)人單核細(xì)胞系THP-1產(chǎn)生前炎癥性細(xì)胞因子(CKs)TNF-α，IL-1β和IL-6；以及對(duì)絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)和激活蛋白-1(AP-1)的激活情況；并研究LAMPs誘導(dǎo)產(chǎn)生CKs是否與這些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活有關(guān)。 方法： 培養(yǎng)Mg標(biāo)準(zhǔn)株G37并提取其LAMPs。用所提取的LAMPs刺激THP-1

2、細(xì)胞，ELISA雙抗體夾心法檢測(cè)其對(duì)前炎癥性細(xì)胞因子TNF-α，IL-1β和IL-6的誘生情況；同時(shí)通過(guò)Westernblot檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)、應(yīng)激活化蛋白激酶/c-Jun氨基端激酶(SAPK/JNK)和p38磷酸化的影響；并用凝膠遷移滯后實(shí)驗(yàn)(EMSA)分析LAMPs對(duì)THP-1細(xì)胞NF-κB和AP-1DNA結(jié)合活性的改變情況；隨后THP-1細(xì)胞分別與不同濃度的ERK1/2特異性抑制劑PD98059、p

3、38特異性抑制劑SB203580、SAPK/JNK抑制劑SP600125或NF-κB特異性抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)孵育30min，再加入3μg/mlLAMPs刺激24h，ELISA分析其對(duì)LAMPs誘導(dǎo)產(chǎn)生CKs的影響。 結(jié)果： (1)不同濃度的LAMPs(0.5μg/ml～3μg/ml)能明顯誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α，IL-1β和ID—6，且CKs的產(chǎn)生與LAMPs呈明顯的劑量依賴(lài)性；當(dāng)LAMPs

4、濃度高于3μg/ml時(shí)，TNF—α，IL-1β和IL—6產(chǎn)生的量明顯減少。 (2)LAMPs刺激THP—1細(xì)胞15min后，Westernblot能檢測(cè)到明顯的磷酸化的SAPK/JNK1/2、p38和ERK1/2條帶，30min后達(dá)到高峰，隨后逐漸下降，持續(xù)時(shí)間達(dá)60min以上；而細(xì)胞總SAPK/JNK1/2和p38的量(包括磷酸化和非磷酸化的量)在不同時(shí)間段幾乎保持恒定；同時(shí)LAMPs也能增強(qiáng)NF—κB和AP—1DNA結(jié)合活性

5、，其峰值位于刺激后2h。 (3)PD98059能以劑量依賴(lài)性方式抑制LAMPs誘導(dǎo)的TNF—α和IL—β產(chǎn)生，但不能抑制IL—6；SP600125能部分抑制IL—6產(chǎn)生，但對(duì)TNF—α和IL—β的產(chǎn)生無(wú)明顯影響；而SB203580和PDTC能抑制TNF—α，IL-1β和IL—6這三種CKs的產(chǎn)生。 結(jié)論： (1)MgLAMPs能誘導(dǎo)THP—1產(chǎn)生TNF—α，IL-1β和IL—6； (2)LAMPs能激活T