生殖支原體LAMPs激活NF-κB誘導(dǎo)人單核細(xì)胞表達(dá)前炎癥細(xì)胞因子及凋亡.pdf

1、目的：研究從生殖支原體（Mg）提取的脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白（LAMPs）在體外誘導(dǎo)人單核細(xì)胞(THP-1)表達(dá)TNF-α、IL-1β與IL-6及其mRNA的表達(dá)水平，研究該膜蛋白能否激活THP-1細(xì)胞中核因子kappa B（NF-κB）及誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生凋亡的情況，以便了解Mg潛在的致病性，為進(jìn)一步探討Mg LAMPs誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)前炎癥性細(xì)胞因子及誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生凋亡的分子機(jī)制提供實(shí)驗依據(jù)。 方法：采用Mg提取的LAMPs刺激THP-1

2、細(xì)胞，分別用ELISA法和RT-PCR方法分析TNF-α、IL-1β與IL-6的產(chǎn)生和其mRNA的表達(dá)；采用凝膠電泳遷移率檢測（EMSA）方法檢測NF-κB的激活，并分析NF-κB抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）對Mg LAMPs處理的THP-1細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α、IL-1β與IL-6的量和其mRNA的表達(dá)及對細(xì)胞凋亡的影響。不同實(shí)驗組的細(xì)胞用丫啶橙（AO）/溴化乙啶（EB）染色法及AnnexinV-FITC-PI染色法檢測細(xì)胞凋

3、亡。 結(jié)果：Mg LAMPs能以時間和劑量依賴方式刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α、IL-1β與IL-6，；當(dāng)LAMPs的濃度為3μg/mL時產(chǎn)生的TNF-α、IL-1β與IL-6量最多，濃度分別為（1885.29±58.62）pg/mL、（256.20±2.03）pg/mL、（35.29±0.49）pg/mL；但當(dāng)LAMPs從3μg/mL增加到5μg/mL時，TNF-α、IL-1β與IL-6產(chǎn)生的量反而減少。另外當(dāng)LAMPs刺

4、激細(xì)胞6h后即可從培養(yǎng)基中檢測到TNF-α、IL-1β與IL-6，而刺激12h后產(chǎn)生的量則達(dá)到高峰。在用該膜蛋白與NF-κB的抑制劑PDTC共同處理THP-1細(xì)胞后，TNF-α、IL-1β與IL-6及其mRNA表達(dá)水平能被抑制。Mg LAMPs處理THP-1細(xì)胞1h后，其細(xì)胞漿內(nèi)的NF-κB即被激活，使其從細(xì)胞漿中轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核內(nèi)。Mg LAMPs可誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞發(fā)生凋亡，且PDTC能抑制LAMPs誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞發(fā)生凋亡。