前炎癥細(xì)胞因子誘導(dǎo)的小鼠膠質(zhì)細(xì)胞激活和Bcl-2表達(dá)以及與年齡的關(guān)系.pdf

1、目的：1.探討小鼠腦實質(zhì)，尤其是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對于兩種前炎癥細(xì)胞因子丙種干擾素和腫瘤壞死因子(IFN-γ和TNF-α)的混合物誘導(dǎo)的急性神經(jīng)炎癥反應(yīng)以及這種反應(yīng)是否隨著年齡的改變而變化； 2.探討前炎癥細(xì)胞因子對神經(jīng)元存活的影響； 3.探討神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在對抗炎癥反應(yīng)時二者的相互關(guān)系。 方法：將不同年齡的動物C57BL/6J小鼠，分成三個組：2.3-3.5個月作為青年組，10-11個月作為中年組，19-22個

2、月作為老年組。依賴立體定位技術(shù)，于小鼠右側(cè)側(cè)腦室內(nèi)注射兩種前炎癥細(xì)胞因子的混合物(IFN-γ2μl+TNF-α2μl，生物活性均為500單位/每微升)4μl。PBS作為實驗對照組。動物分別存活1、2和4天。使用GFAP免疫組織化學(xué)法檢測小鼠腦實質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP的表達(dá)變化；用F4/80和CDllb兩種小膠質(zhì)細(xì)胞表面抗原的免疫組織化學(xué)法檢測小膠質(zhì)細(xì)胞F4/80和CD11b的表達(dá)變化；用抗凋亡蛋白Bcl-2的免疫組織化學(xué)法檢測神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)

3、胞和神經(jīng)元的Bcl-2的表達(dá)變化，并采用Western blot技術(shù)對其進(jìn)行定量分析。Fluoro Jade B染色和Tunel染色，檢測在前炎癥細(xì)胞因子的作用下，神經(jīng)元是否有凋亡或者壞死；免疫熒光雙重標(biāo)記技術(shù)，觀察神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與Bcl-2陽性神經(jīng)元之間的相互關(guān)系。 結(jié)論：大腦腦室內(nèi)注射聯(lián)合細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α的混合物4μl，能夠誘導(dǎo)腦實質(zhì)急性神經(jīng)炎癥的發(fā)生。細(xì)胞因子注射后24小時，小膠質(zhì)細(xì)胞明顯被激活，F(xiàn)4/80和C

4、D11b的表達(dá)上調(diào)；2天后，星形膠質(zhì)細(xì)胞明顯被激活，GFAP的表達(dá)上調(diào)；小膠質(zhì)細(xì)胞的活化早于星形膠質(zhì)細(xì)胞；神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的激活在老齡動物腦中最為明顯。表明激活的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞可能參與腦內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)，老齡動物腦的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對于炎癥刺激的易感性增強(qiáng)。此劑量的聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo)的小鼠急性神經(jīng)炎癥反應(yīng)，腦內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)已經(jīng)死亡和正在經(jīng)歷死亡的神經(jīng)元。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的小鼠腦實質(zhì)急性神經(jīng)炎癥反應(yīng)，三個年齡組動物皮質(zhì)、海馬內(nèi)抗凋亡蛋白：Bcl-2表達(dá)均有上調(diào)，