慢性腦缺血鼠認(rèn)知功能障礙與細(xì)胞因子TGF-β-,1-、Bcl-2、BDNF、NGF的表達(dá).pdf

1、目的：探討慢性腦缺血大鼠的空間記憶能力與額葉皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)細(xì)胞因子TGF-β<,1>、Bcl-2、BDNF、NGF表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化及相互關(guān)系，并給予尼莫地平、尼麥角林腹腔注射，觀察治療后大鼠記憶能力及細(xì)胞因子TGF-β<,1>、Bcl-2、BDNF、NGF表達(dá)的變化規(guī)律，為臨床治療血管性癡呆提供理論依據(jù)。 方法：選取90只健康雄性Wistar大鼠，采取永久結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈的方法，制備與人類慢性腦缺血比較相似的慢性腦缺血大鼠

2、模型。術(shù)后2周給予尼莫地平注射液（0.5mg/kg）、注射用尼麥角林（1mg/kg）腹腔注射，每天一次，直至處死。手術(shù)后1、3、7、14、28天分別對(duì)術(shù)后大鼠進(jìn)行卒中指數(shù)、神經(jīng)病學(xué)癥狀評(píng)定。手術(shù)后2周、4周、8周、12周、16周應(yīng)用Y迷宮檢測(cè)各組大鼠的空間辨別記憶能力。采用HE染色，光鏡觀察各組大鼠腦組織的形態(tài)學(xué)變化情況：應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠額葉皮質(zhì)、海馬CA1區(qū)細(xì)胞因子TGF-β<,1>、Bcl-2、BDNF、NGF表達(dá)的動(dòng)態(tài)

3、變化。應(yīng)用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，首先進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)，各組間比較用單因素方差分析，兩兩比較應(yīng)用q檢驗(yàn)。 結(jié)果： 1．慢性前腦缺血鼠認(rèn)知功能改變雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎后3天，卒中指數(shù)與神經(jīng)病學(xué)指數(shù)二項(xiàng)指標(biāo)均接近正常，無(wú)運(yùn)動(dòng)障礙。采用Y迷宮檢測(cè)各組大鼠術(shù)后空間記憶能力，結(jié)果如下：術(shù)后2周大鼠記憶功能下降，個(gè)體差異很大，部分大鼠的Y迷宮正確次數(shù)明顯減少；缺血4周時(shí)大鼠記憶能力比對(duì)照組明顯下降，差異顯著P＜

4、0.01。以后Y迷宮正確次數(shù)逐漸減少，缺血4個(gè)月時(shí)與對(duì)照組比較下降最明顯。尼莫地平組、尼麥角林組分別在各時(shí)間點(diǎn)Y迷宮正確次數(shù)明顯增加，與缺血組比較差異具有顯著性意義，P<0.01。尼麥角林組Y迷宮正確次數(shù)較尼莫地平組明顯增加，差異具有顯著性意義，P<0.01。 2．組織病理學(xué)改變對(duì)照組大鼠皮質(zhì)、海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)及分布正常。大鼠缺血1周，額葉皮質(zhì)、海馬及尾狀核等部位部分神經(jīng)細(xì)胞濃染，核濃染、固縮，頂樹(shù)突延長(zhǎng)，胞體呈三角形，胞漿致

5、密，周圍出現(xiàn)空隙區(qū)。缺血2～4周，3只大鼠尾狀核、額葉皮質(zhì)和胼胝體區(qū)出現(xiàn)梗塞灶。額葉皮質(zhì)和海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死、脫失，膠質(zhì)細(xì)胞增生。缺血8周以后未見(jiàn)明顯梗塞灶，皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)可見(jiàn)變性壞死的神經(jīng)細(xì)胞逐漸減少，但細(xì)胞脫失逐漸加重，膠質(zhì)細(xì)胞增生逐漸減輕，腦室擴(kuò)張，皮質(zhì)萎縮變薄。尼莫地平組及尼麥角林組大鼠額葉皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死、脫失及膠質(zhì)細(xì)胞增生均較缺血組減輕。 3．額葉皮質(zhì)與海馬CA1區(qū)TGF-β<,1

6、>、Bc1-2、BDNF、NGF的表達(dá) 對(duì)照組額葉皮質(zhì)與海馬CA1區(qū)均有微弱的TGF-β<,1>表達(dá)。缺血1周時(shí)額葉皮質(zhì)與海馬CA1區(qū)TGF-β<,1>表達(dá)開(kāi)始增高，2周時(shí)達(dá)高峰，以后逐漸下降，額葉皮質(zhì)12周、海馬CA1區(qū)8周時(shí)TGF-β<,1>表達(dá)仍高于對(duì)照組，P<0.05。尼莫地平組及尼麥角林組，與缺血組各時(shí)間點(diǎn)比較額葉皮質(zhì)與海馬CA1區(qū)TGF-β<,1>表達(dá)顯著增加，P<0.01。尼麥角林組額葉皮質(zhì)與海馬CA1區(qū)TGF-β

7、<,1>表達(dá)明顯高于尼莫地平組，差異有顯著性，P<0.05。 對(duì)照組額葉皮質(zhì)與海馬CA1區(qū)有少量的Bc1-2陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。缺血1周時(shí)額葉皮質(zhì)與海馬CA1區(qū)額葉皮質(zhì)與海馬Bc1-2表達(dá)開(kāi)始增高，2周時(shí)達(dá)高峰，以后逐漸下降，額葉皮質(zhì)至12周時(shí)與對(duì)照組比較仍有顯著性差異，P<0.05；海馬CA1區(qū)4周時(shí)與對(duì)照組比較仍有顯著差異，P<0.01。尼莫地平組及尼麥角林組，與缺血組各時(shí)間點(diǎn)比較額葉皮質(zhì)與海馬Bc1-2表達(dá)顯著增加，P<0.01

8、。尼麥角林組額葉皮質(zhì)與海馬Bc1-2表達(dá)明顯高于尼莫地平組，差異有顯著性，P<0.05。 對(duì)照組額葉皮質(zhì)與海馬CA1區(qū)有少量的BDNF陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。缺血1周時(shí)額葉皮質(zhì)與海馬CA1區(qū)BDNF表達(dá)開(kāi)始增高，2周時(shí)達(dá)高峰，以后逐漸下降，額葉皮質(zhì)至12周時(shí)與對(duì)照組比較仍有顯著性差異，P<0.05。海馬CA1區(qū)8周時(shí)與對(duì)照組比較仍有顯著差異，P<0.01。尼莫地平組及尼麥角林組，與缺血組各時(shí)間點(diǎn)比較額葉皮質(zhì)與海馬BDNF表達(dá)均有顯著性增高

9、，P<0.01。尼麥角林組額葉皮質(zhì)與海馬BDNF表達(dá)明顯高于尼莫地平組，差異有顯著性，P<0.05。 對(duì)照組額葉皮質(zhì)與海馬CA1區(qū)有少量NGF陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)。缺血1周時(shí)額葉皮質(zhì)與海馬CA1區(qū)NGF表達(dá)開(kāi)始增高，2周時(shí)達(dá)高峰，以后逐漸下降，額葉皮質(zhì)至12周時(shí)與對(duì)照組比較仍有顯著性差異，P<0.05。海馬CA1區(qū)12周時(shí)與對(duì)照組比較仍有顯著差異，P<0.05。尼莫地平組及尼麥角林組，與缺血組各時(shí)間點(diǎn)比較額葉皮質(zhì)與海馬NGF表達(dá)均顯著

10、性增高，P<0.05。尼麥角林組額葉皮質(zhì)與海馬CA1區(qū)NGF表達(dá)明顯高于尼莫地平組，差異有顯著性，P<0.05。 結(jié)論： 1．雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎的慢性腦缺血鼠出現(xiàn)認(rèn)知功能進(jìn)行性減退。 2．雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎可引起實(shí)驗(yàn)大鼠額葉皮質(zhì)錐體細(xì)胞進(jìn)行性脫失伴膠質(zhì)細(xì)胞增生，海鳥(niǎo)CA1區(qū)錐體細(xì)胞嚴(yán)重脫失伴基質(zhì)疏松、微空泡形成。 3．細(xì)胞因子TGF-β<,1>、Bcl-2、BDNF、NGF不僅參與了雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎大