依達(dá)拉奉對慢性腦缺血鼠認(rèn)知功能障礙與TGF-β-,1-、Bcl-2、MDA、SOD陽性表達(dá)影響的研究.pdf

1、研究目的：探討慢性腦缺血大鼠的空間記憶能力和額葉皮質(zhì)、海馬區(qū)自由基(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、轉(zhuǎn)化生長因子β1 (TGF-β1)、Bcl-2 因子陽性表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化及相互關(guān)系，藥物依達(dá)拉奉對慢性缺血鼠認(rèn)知功能障礙與 TGF-β1、Bcl-2、SOD、MDA 陽性表達(dá)影響的研究。實(shí)驗(yàn)過程中依達(dá)拉奉、腦蛋白水解物腹腔注射，觀察治療后大鼠記憶能力及自由基(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、與轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)、Bcl

2、-2 因子表達(dá)的變化規(guī)律，為臨床尋找抗自由基和提高缺血后學(xué)習(xí)記憶能力，防治血管性癡呆藥物提供理論依據(jù)。 方法：選取健康雄性 Wistar 大鼠，采取永久性結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈的方法，制備與人類慢性腦缺血比較相似的慢性腦缺血大鼠模型。術(shù)后3周開始給予依達(dá)拉奉(10mg/kg) 或腦蛋白水解物注射液(5ml/kg)腹腔注射，每天一次，直至處死。手術(shù)后1、3、7、14、21、28天分別對術(shù)后大鼠進(jìn)行卒中指數(shù)、神經(jīng)病學(xué)癥狀評定。手術(shù)后2

3、周、4周、8周、12周、16周應(yīng)用Y迷宮檢測各組大鼠的空間辨別記憶能力。采用HE染色，光鏡觀察各組大鼠腦組織的形態(tài)學(xué)變化情況；應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測大鼠額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)、Bcl-2凋亡因子表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化；應(yīng)用光化學(xué)比色法測定自由基(MDA)超氧化物歧化酶(SOD)的變化。應(yīng)用SPSS12.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，首先進(jìn)行正態(tài)分布及方差齊性檢驗(yàn)，各組間比較用單因素方差分析，兩兩比較應(yīng)用q檢驗(yàn)。 結(jié)

4、果： 1、慢性前腦缺血鼠認(rèn)知功能改變雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎后3天，卒中指數(shù)與神經(jīng)病學(xué)指數(shù)兩項(xiàng)指標(biāo)均接近正常，無運(yùn)動(dòng)障礙。采用Y迷宮檢測各組大鼠術(shù)后空間記憶能力，結(jié)果如下：術(shù)后2周大鼠記憶功能下降，個(gè)體差異很大，部分大鼠的Y迷宮正確次數(shù)明顯減少；缺血4周時(shí)大鼠記憶能力比對照組明顯下降，差異顯著 P<0.01。 以后Y迷宮正確次數(shù)逐漸減少，缺血4個(gè)月時(shí)與對照組比較下降最明顯。依達(dá)拉奉組、腦蛋白水解物組分別在各時(shí)間點(diǎn)Y迷宮正確次數(shù)明

5、顯增加，與缺血組比較差異具有顯著性意義，P<0.01，依達(dá)拉奉組Y迷宮正確次數(shù)較腦蛋白水解物組明顯增加，差異具有顯著性意義，P<0.01。 2、組織病理學(xué)改變：對照組大鼠皮質(zhì)、海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)及分布正常。缺血組大鼠缺血4周，2只大鼠尾狀核、額葉皮質(zhì)和胼胝體區(qū)出現(xiàn)梗塞灶。額葉皮質(zhì)和海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死、脫失、膠質(zhì)細(xì)胞增生。缺血8周以后未見明顯梗塞灶，皮質(zhì)及海馬區(qū)可見變性壞死的神經(jīng)細(xì)胞逐漸減少，但細(xì)胞脫失逐漸加重，腦室擴(kuò)張，

6、皮質(zhì)萎縮變薄。依達(dá)拉奉組及腦蛋白水解物組大鼠額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死、脫失及膠質(zhì)細(xì)胞增生均較缺血組減輕。 3、額葉皮質(zhì)與海馬區(qū)自由基(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)與轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)、Bcl-2抑凋亡因子的表達(dá)： 對照組額葉皮質(zhì)與海馬區(qū)均有微弱 TGF-β1表達(dá)，說明內(nèi)源性 TGF-β1表達(dá)水平很低。TGF-β1 表達(dá)在慢性腦缺血損傷中呈現(xiàn)一動(dòng)態(tài)變化過程，且不同部位的表達(dá)存在差異。慢性腦缺血

7、后，TGF-β1的表達(dá)主要集中在皮質(zhì)及海馬內(nèi)，表達(dá)細(xì)胞是膠質(zhì)細(xì)胞與錐體細(xì)胞，還有極少數(shù)巨噬細(xì)胞。慢性腦缺血4周之內(nèi)達(dá)高峰，以后隨著缺血時(shí)間的延長逐漸下降。缺血組缺血12周時(shí)在額葉皮質(zhì)區(qū)TGF-β1表達(dá)高于對照組，P<0.05；缺血組缺血8周時(shí)在海馬區(qū)TGF-β1表達(dá)高于對照組，P<0.05。依達(dá)拉奉及腦蛋白水解物組TGF-β1表達(dá)分別與對照組、缺血組各時(shí)間點(diǎn)比較在額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)表達(dá)明顯增高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01。在各時(shí)間點(diǎn)各

8、區(qū)，依達(dá)拉奉組TGF-β1表達(dá)高于腦蛋白水解物組，差異有顯著性，P<0.01 (缺血4、8周)，P<0.05 (缺血 12、16周)。 對照組額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)有少量Bcl-2 陽性細(xì)胞表達(dá)。缺血組與用藥組Bcl-2高峰表達(dá)均在缺血4周內(nèi)，以后逐漸下降，到12周時(shí)缺血組與對照組相比額葉皮質(zhì)Bcl-2表達(dá)仍高于對照組，差異顯著，P<0.05。缺血4周時(shí)海馬區(qū)Bcl-2表達(dá)明顯高于對照組P<0.01，缺血4周后Bcl-2表達(dá)下降，缺血

9、8周時(shí)海馬區(qū)與對照組比較Bcl-2表達(dá)無顯著差異，P>0.05。腦蛋白水解物與依達(dá)拉奉組，分別與對照組、缺血組各時(shí)間點(diǎn)比較額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)Bcl-2表達(dá)均明顯增高，差異有顯著性，P<0.01。依達(dá)拉奉組額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)Bcl-2表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均高于腦蛋白水解物組，差異有顯著性，P<0.01 (缺血4、8周)，P<0.05(缺血12、16周)。 對照組額葉皮質(zhì)與海馬區(qū)均有少量MDA表達(dá)。缺血組及藥物組缺血4周MDA表達(dá)均明顯增高，

10、呈一高峰狀態(tài)，以后逐漸下降。各組缺血12周時(shí)表達(dá)基本恢復(fù)正常，各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。缺血組缺血8周時(shí)額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)MDA的表達(dá)仍明顯高于對照組，有顯著差異，P<0.01，而依達(dá)拉奉組和腦蛋白水解物組8周時(shí)額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)MDA的表達(dá)也高于對照組，P<0.05。依達(dá)拉奉組和腦蛋白水解物組8周時(shí)額葉皮質(zhì)及海馬區(qū) MDA 的表達(dá)明顯低于缺血組，有顯著差異，P<0.01。依達(dá)拉奉組額葉皮質(zhì)與海馬區(qū)MDA表達(dá)明顯低于腦蛋白水解物組，差異有顯著性

11、P<0.01(缺血 4周)，P<0.05(缺血8周)。 對照組額葉皮質(zhì)與海馬區(qū)SOD表達(dá)星陽性。缺血組和藥物組缺血4周SOD表達(dá)明顯減少，呈一低峰，以后逐漸增加。各組缺血16周時(shí)SOD表達(dá)基本恢復(fù)正常，與對照組相比無明顯降低，統(tǒng)計(jì)學(xué)無意義。缺血組缺血12周額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)SOD表達(dá)仍明顯低于對照組，有顯著差異，P<0.01。依達(dá)拉奉組缺血8周額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)SOD 表達(dá)低于對照組，P<0.01。腦蛋白水解物組缺血12周額葉皮質(zhì)及

12、海馬區(qū)SOD表達(dá)仍低于對照組，P(0.05。依達(dá)拉奉組和腦蛋白水解物組與缺血組比較，缺血 12周時(shí)各區(qū)SOD表達(dá)均高于缺血組，差異顯著，P<0.01。依達(dá)拉奉組缺血8周、12周時(shí)額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)SOD表達(dá)均高于腦蛋白水解物組，差異有顯著性，P<0.01( 缺血8周)，P<0.05(缺血12周)。 結(jié)論： 1、雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎的慢性腦缺血鼠隨缺血時(shí)間延長出現(xiàn)認(rèn)知功能進(jìn)行性減退。 2、雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎可引起實(shí)

13、驗(yàn)大鼠額葉皮質(zhì)錐體細(xì)胞進(jìn)行性脫失伴膠質(zhì)細(xì)胞增生，海馬區(qū)錐體細(xì)胞嚴(yán)重脫失伴基質(zhì)疏松、微空泡形成。 3、雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎的慢性腦缺血鼠SOD值明顯降低，MDA值明顯增加，TGF-β1、Bcl-2 值明顯增加。四種因子不僅參與慢性腦缺血大鼠細(xì)胞凋亡，在遲發(fā)性神經(jīng)元壞死損傷中也起一定的作用。其中通過促進(jìn)Bcl-2的表達(dá)而抑制神經(jīng)元的凋亡是細(xì)胞因子發(fā)揮抗腦缺血作用的重要途徑。 4、依達(dá)拉奉及腦蛋白水解物均有改善慢性腦缺血大鼠的