雄黃對(duì)Bcl-2和Bax在原代培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的:膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中常見的來源于神經(jīng)上皮組織的惡性腫瘤，對(duì)周圍組織具有侵襲性，呈浸潤性生長，無包膜，邊界不清，術(shù)后易復(fù)發(fā)。目前膠質(zhì)母細(xì)胞瘤尚無法根治，臨床上多采用以手術(shù)為主，輔以放療、化療、生物及免疫治療的綜合治療。目前雄黃在抗腫瘤方面的應(yīng)用僅限于血液系統(tǒng)腫瘤的治療，療效明顯并取得了較高的緩解率。但尚未見關(guān)于雄黃對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤作用的相關(guān)研究報(bào)道。
　　 細(xì)胞培養(yǎng)已成為醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究過程中的一項(xiàng)重要

2、技術(shù)。在體外培養(yǎng)條件下借助細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的研究手段，將為深入研究細(xì)胞瘤增殖、凋亡相關(guān)的分子機(jī)制提供了新的線索和手段。隨著對(duì)細(xì)胞凋亡研究的深入，發(fā)現(xiàn)許多疾病的發(fā)生都與細(xì)胞凋亡失調(diào)有關(guān)，細(xì)胞凋亡的研究也因此成為當(dāng)今生命科學(xué)領(lǐng)域中最引人矚目的領(lǐng)域之一。Bcl-2是迄今研究的最深入、最廣泛的凋亡調(diào)控基因家族。Bcl-2具有抑制細(xì)胞凋亡的作用，而該家族的另一成員Bax則促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。
　　 本課題以取自人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的為材料首先將細(xì)胞從

3、腫瘤組織中分離出來，而后通過檢測(cè)Bcl-2和Bax兩基因在雄黃干預(yù)前后mRNA表達(dá)量的變化，初步探討雄黃在抗腫瘤方面的分子機(jī)制。
　　 材料與方法:研究對(duì)象為2010年4月至2010年12月鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除的9例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤標(biāo)本(均于術(shù)后經(jīng)病檢證實(shí))。所有病例均為原發(fā)病例，術(shù)前未行化療及放射治療。腫瘤術(shù)中切除后，挑選腫瘤外觀較好的組織保存于事先配置的取材培養(yǎng)基中，于0℃-4℃保存。術(shù)后即刻行腫瘤組織的分離培養(yǎng)

4、。按照2007年WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)，9例均為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。首先采用冷胰酶分離方法將細(xì)胞從腫瘤組織中分離出來。分離后采用吉姆薩染色對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。而后，所有標(biāo)本均采用貼壁培養(yǎng)的方法，于細(xì)胞在對(duì)數(shù)生長期內(nèi)進(jìn)行傳代，以雄黃溶液干預(yù)其生長。雄黃溶液濃度分為低濃度(40mg/L)和高濃度(70mg/L)兩組。采用RT-PCR法檢測(cè)Bcl-2基因和Bax基因的mRNA在雄黃干預(yù)前后膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中的表達(dá)量。統(tǒng)計(jì)學(xué)采用SAS9

5、.1統(tǒng)計(jì)軟件，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)：α=0.05。
　　 結(jié)果:
　　 1、吉姆薩染色結(jié)果：鏡下可見細(xì)胞核呈紫羅蘭色，核仁藍(lán)黑色，細(xì)胞質(zhì)透光發(fā)亮，并可見細(xì)胞及細(xì)胞核形狀、大小不一，并出現(xiàn)雙核及多核現(xiàn)象，形態(tài)學(xué)上與腫瘤細(xì)胞相符合。
　　 2、RT-PCR檢測(cè)結(jié)果：Bcl-2基因在雄黃溶液干預(yù)前后的表達(dá)量分別為：0.89±0.04，0.46±0.05(40mg/L)，0.48±0.04(70mg/L)；Bax基因在雄黃溶液干預(yù)前