肺炎支原體LAMPs經PI3K-Nrf2誘導人單核細胞表達HO-1.pdf

1、目的：
　　探討肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，Mp）脂質相關膜蛋白（lipid-associated membrane proteins，LAMPs）對人單核細胞表達血紅素氧合酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）的影響，并探討可能的調控機制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)THP-1細胞，用不同濃度的LAMPs作用后，分別采用realtime-PCR和Western blot檢測HO

2、-1 mRNA和蛋白的表達。同時采用不同濃度的放線菌素D（ActD）和放線菌酮（CHX）預處理細胞，觀察其對HO-1表達的影響，以證實HO-1的表達是否通過轉錄和翻譯水平；提取LAMPs作用前后的核蛋白，凝膠遷移率實驗檢測Nrf2的核轉位、Western blot檢測Akt的磷酸化情況；同時采用PI3K抑制劑LY294002處理細胞，觀察其對LAMPs誘導Nrf2核轉位及HO-1表達的影響；最后采用 siRNA干擾Nrf2表達，以證實N

3、rf2是否參與調控HO-1表達。
　　結果：
　　(1)0～5μg/mL LAMPs能以劑量依賴性方式誘導THP-1表達HO-1 mRNA和蛋白；
　　(2)5μg/mL LAMPs能誘導THP-1細胞Akt磷酸化，并能增強其DNA結合活性；PI3K抑制劑 LY294002處理后，可明顯抑制 LAMPs誘導的HO-1表達和Nrf2核轉位；
　　(3)干擾Nrf2表達后，可明顯下調LAMPs誘導THP-1細胞表達H