蛋白酶激活受體在人單核細(xì)胞和T細(xì)胞上的表達(dá)及功能.pdf

1、凝血酶、胰蛋白酶、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶等絲氨酸蛋白酶能調(diào)節(jié)凝血和纖維蛋白溶解平衡、降解神經(jīng)肽以參與神經(jīng)性水種,調(diào)控補(bǔ)體系統(tǒng)從而在炎癥反應(yīng)時發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。近年的研究顯示,它們還能通過蛋白酶激活受體(proteinase activated receptor, PARs)調(diào)節(jié)細(xì)胞的功能而在炎癥和免疫反應(yīng)中起重要作用。PARs是新的G蛋白偶聯(lián)受體,目前已發(fā)現(xiàn)有四種PARs,分別為PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4,凝血酶可以

2、激活PAR-1、PAR-3和PAR-4,胰蛋白酶可以激活PAR-1、PAR-2和PAR-4,類胰蛋白酶和彈性蛋白酶可以激活 PAR-2。單核細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞是炎征和免疫反應(yīng)重要的效應(yīng)細(xì)胞,但是 PARs在人外周血單核細(xì)胞和T細(xì)胞上表達(dá)及它們分泌的細(xì)胞因子上的影響則知之甚少。
　　采用磁激活的細(xì)胞分選法(magnetic activated cell sorting, MACS)純化人外周血單核細(xì)胞和T細(xì)胞,分別用RT-PCR和流式

3、細(xì)胞術(shù)檢測外單核細(xì)胞和T細(xì)胞上的PARs在基因和蛋白質(zhì)水平的表達(dá);用凝血酶、胰蛋白酶、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶及 PARs的激動肽分別激發(fā)MACS純化后單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞16小時后,用ELISA檢測單核細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-6、IL-1β和IL-12,T細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-6和IL-13。
　　實驗顯示,人外周血單核細(xì)胞表達(dá)PAR-1、PAR-3和PAR-4但不表達(dá)PAR-2蛋白質(zhì),單核細(xì)胞表達(dá)PAR-1和PAR-3,但是不表

4、達(dá)PAR-2和PAR-4 mRNAs。凝血酶、胰蛋白酶、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶呈濃度依賴性地誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-6,當(dāng)這些蛋白酶酶活性被它們的抑制劑抑制后,它們誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生 IL-6的能力被抑制。PAR-1激動肽SFLLR-NH2和PAR-4激動肽 GYPGQV-NH2可濃度依賴性地誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生 IL-6, PAR-1反激動肽RLLFS-NH2和PAR-4反激動肽VQGPYG-NH2不能誘導(dǎo)單細(xì)胞產(chǎn)生IL-6,而PAR-3激動

5、肽TFRGAP-NH2和反激動肽PAGRFT-NH2對于單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-6無明顯作用。蛋白酶及PAR激動肽在各自工作濃度對于單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β和IL-12無明顯作用。
　　實驗還顯示,人外周血T細(xì)胞表達(dá)PAR-1、PAR-和PAR-3但不表達(dá)PAR-4蛋白質(zhì),與流式細(xì)胞結(jié)果一致,T細(xì)胞表達(dá)PAR-1、PAR-2和PAR-3,但是不表達(dá)PAR-4 mRNAs。凝血酶、胰蛋白酶、類胰蛋白酶呈濃度依賴性地誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生IL-6,當(dāng)

6、這些蛋白酶酶活性被它們的抑制劑抑制后,它們誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生IL-6的能力被抑制。PAR-1拮抗劑,SCH79797,在濃度為1μM時能夠抑制凝血酶和胰蛋白酶誘導(dǎo)的T細(xì)胞 IL-6的產(chǎn)生;FSLLRY-NH2是PAR-2拮抗劑,當(dāng)其在濃度為400μM時幾乎完全抑制胰蛋白酶和類胰蛋白酶引起的T細(xì)胞IL-6的產(chǎn)生。PAR-1相對特異的激動肽SFLLR-NH2在濃度為100?M時誘導(dǎo)的T細(xì)胞IL-6釋放量較基礎(chǔ)釋放量增加3.6倍,PAR-1反激動

7、肽RLLFS-NH2對于T細(xì)胞產(chǎn)生IL-6無明顯作用;與此相似,PAR-1特異的激動肽TFLLRN-NH2在50?M濃度時明顯地誘導(dǎo)的T細(xì)胞產(chǎn)生IL-6,而反激動肽NRLLFT-NH2對于T細(xì)胞產(chǎn)生IL-6無明顯作用。PAR-2特異的激動肽SLIGKV-NH2在濃度為10和100?M時能夠呈濃度依賴性地促進(jìn)T細(xì)胞產(chǎn)生IL-6,SLIGKV-NH2在濃度為100?M時誘導(dǎo)的T細(xì)胞IL-6釋放量較基礎(chǔ)釋放量增加3.5倍,而反激動肽VKGIL

8、S-NH2對于T細(xì)胞產(chǎn)生IL-6無明顯作用。PAR-3激動肽 TFRGAP-NH2和反激動肽 PAGRFT-NH2、PAR-4兩個激動肽 GYPGQV-NH2和AYPGKF-NH2及它們的反激動肽 VQGPYG-NH2和FKGPYA-NH2不能誘導(dǎo) T細(xì)胞產(chǎn)生IL-6。PARs的各種激動肽和反激動肽在工作濃度均不能誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生IL-13。
　　總之,凝血酶、胰蛋白酶、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶等絲氨酸蛋白酶可以誘導(dǎo)高度純化的成人外周