CRP和HDL對(duì)THP-1來源的巨噬細(xì)胞LOX-1表達(dá)的影響及其相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究.pdf

1、背景:動(dòng)脈粥樣硬化(As)的病理變化存在變質(zhì)、滲出和增生等炎癥的基本特征，已被公認(rèn)為是一種慢性血管炎癥反應(yīng)。氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)是As形成和發(fā)展的關(guān)鍵因素，具有氧化應(yīng)激和促炎效應(yīng)。oxLDL通過血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)與血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)相互作用引起VEC損傷及內(nèi)皮功能障礙是As病理變化的始動(dòng)環(huán)節(jié)。而oxLDL增強(qiáng)巨噬細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)的吞噬作用是As斑塊的形成和體積進(jìn)展的核心步驟，該過程涉及巨噬細(xì)胞表面

2、多種oxLDL受體，其中包括LOX-1。但目前對(duì)巨噬細(xì)胞上LOX-1的表達(dá)調(diào)控及其參與血管炎癥反應(yīng)病理生理過程的了解甚少。 C反應(yīng)蛋白(CRP)是由肝臟產(chǎn)生的急性期反應(yīng)蛋白，它作為一種炎癥因子直接參與As的形成，可加速巨噬細(xì)胞對(duì)氧化脂質(zhì)的攝取，促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成。高密度脂蛋白(HDL)具有抗氧化和抗炎癥的血管保護(hù)作用，它抑制多種炎性細(xì)胞因子和粘附分子的產(chǎn)生，并通過減少胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡等過程減輕As血管炎癥反應(yīng)。因此研

3、究CRP和HDL對(duì)巨噬細(xì)胞表面LOX-1表達(dá)的影響，有助于深入了解該受體在參與巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)過程中的特殊地位和功能。 目的:本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)的THP-1來源的巨噬細(xì)胞為對(duì)象，研究CRP和HDL對(duì)LOX-1表達(dá)的影響，并觀察其相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，以了解巨噬細(xì)胞表面LOX-1表達(dá)的調(diào)控因素和病理生理意義，及其與動(dòng)脈粥樣硬化血管炎癥反應(yīng)的關(guān)系。 方法: 1.采用PRMI1640培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)人單核細(xì)胞系(THP-1)，

4、經(jīng)PMA誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞，并用免疫組化的方法加以鑒定。 2.在細(xì)胞水平，采用免疫組化、免疫熒光法檢測(cè)CRP和HDL對(duì)THP-1來源的巨噬細(xì)胞LOX-1蛋白表達(dá)的影響，細(xì)胞原位ELISA法定量檢測(cè)CRP和HDL對(duì)LOX-1抗原表達(dá)的影響，半定量RT-PCR法檢測(cè)CRP和HDL對(duì)LOX-1mRNA表達(dá)的影響。 3.在細(xì)胞水平，采用免疫組化法檢測(cè)多種信號(hào)通路抑制劑和CRP共同作用對(duì)THP-1來源的巨噬細(xì)胞LOX-1蛋白表達(dá)的

5、影響，細(xì)胞原位ELISA法定量檢測(cè)多種信號(hào)通路抑制劑和CRP共同作用對(duì)LOX-1抗原表達(dá)的影響，半定量RT-PCR法檢測(cè)多種信號(hào)通路抑制劑和CRP共同作用對(duì)LOX-1mRNA表達(dá)的影響。 4.在細(xì)胞水平，采用免疫組化法檢測(cè)CRP和HDL對(duì)THP-1來源的巨噬細(xì)胞內(nèi)磷酸化-MAPK蛋白表達(dá)的影響，ELISA法定量檢測(cè)CRP和HDL對(duì)磷酸化-MAPK抗原表達(dá)的影響。 結(jié)論: 1.促炎的CRP和抗炎的HDL都能引起TH