東北區(qū)狍遺傳多樣性及性別基因鑒定研究.pdf

1、狍是一種重要的狩獵動(dòng)物，在中國(guó)東北地區(qū)分布廣泛。但由于過(guò)量捕獵，野生種群數(shù)量急劇減少。所以，對(duì)狍的遺傳多樣性以及種群遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，保護(hù)好有限的野生狍資源是一項(xiàng)緊迫的任務(wù)。 分子水平的研究是目前進(jìn)行野生動(dòng)物遺傳變異研究較為準(zhǔn)確的遺傳標(biāo)記。有關(guān)東北區(qū)狍遺傳標(biāo)記研究尚未見(jiàn)報(bào)道，直接使用DNA序列分析探索野生狍遺傳變異也僅見(jiàn)于國(guó)外學(xué)者對(duì)歐洲狍和西伯利亞狍的研究。本研究試圖通過(guò)RAPD標(biāo)記和線粒體DNA測(cè)序，對(duì)存在于核內(nèi)及核外的遺傳物

2、質(zhì)變異情況進(jìn)行研究，同時(shí)對(duì)鹿類(lèi)動(dòng)物的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行分析。通過(guò)狍Sry基因PCR擴(kuò)增和測(cè)序，對(duì)狍的性別決定機(jī)制進(jìn)行研究，進(jìn)而對(duì)野生狍自然種群的性別結(jié)構(gòu)作出評(píng)估。 在RAPD標(biāo)記分析中，從80個(gè)隨機(jī)引物中篩選20個(gè)對(duì)32個(gè)狍樣本進(jìn)行了擴(kuò)增，每個(gè)引物擴(kuò)增出2～8個(gè)明顯的片斷，共檢出123條帶，114條帶表現(xiàn)出多態(tài)性，多態(tài)百分率92.7％。多態(tài)條帶比率(PPB)、Shannon多樣指數(shù)及Nei基因多樣性指數(shù)(h)均顯示東北狍較為豐富的遺傳

3、多樣性。東北地區(qū)長(zhǎng)白山、大興安嶺和完達(dá)山3個(gè)地理種群中，大興安嶺種群遺傳多樣性最低。UPGMA聚類(lèi)分析能夠清楚區(qū)分3個(gè)地理居群的個(gè)體，多態(tài)條帶表型的主座標(biāo)分析(PCA)更直觀地展現(xiàn)了這一結(jié)果。在進(jìn)行居群遺傳分化分析時(shí)，采用Nei遺傳距離、Gst基因分化系數(shù)、Shannon多樣性指數(shù)的階層分析和AMOVA遺傳變異巢式分析等多種方法，結(jié)果顯示東北狍種群分化程度不高，遺傳變異主要來(lái)自種群內(nèi)。 線粒體DNA是核外遺傳物質(zhì)，由于其分子結(jié)構(gòu)

4、簡(jiǎn)單、進(jìn)化速率快等特點(diǎn)常被用來(lái)進(jìn)行遺傳多樣性分析和系統(tǒng)發(fā)育研究。本研究對(duì)16個(gè)狍樣本mtDNAD-loop區(qū)序列進(jìn)行了測(cè)定，經(jīng)鑒定舍棄其中4條序列。12個(gè)樣本獲待了614bp的序列片斷，在可比較的562bp序列中，存在40個(gè)變異位點(diǎn)，多態(tài)位點(diǎn)的比例為7.12％，其中20個(gè)是單態(tài)位點(diǎn)，20個(gè)是簡(jiǎn)約化信息位點(diǎn)，轉(zhuǎn)換38個(gè)，顛換2個(gè)。此外還存在2個(gè)未測(cè)出位點(diǎn)，3個(gè)插入/缺失位點(diǎn)。共檢測(cè)到12種單元型，單元型間的序列差異平均為2.00％。核苷酸

5、多樣度(π)比較低，僅有0.0204。AMOVA分析，有58.09％的變異來(lái)自種群內(nèi)，結(jié)果與RAPD分析完全一致。mtDNAD-loop數(shù)據(jù)支持將東北區(qū)狍歸為Capreoluspygargus種下的一個(gè)亞種(Capreoluspygargusmantschuricus)，Capreoluspygargus與Capreoluscapreolus互為獨(dú)立種。通過(guò)構(gòu)建系統(tǒng)樹(shù)和單元型網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖確定各群體間的關(guān)系。 本研究測(cè)定了東北狍mt

6、DNACytb基因445bp序列片斷，結(jié)合GenBank相關(guān)序列資源對(duì)2科12屬18種鹿類(lèi)動(dòng)物的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)進(jìn)行了重建。最大簡(jiǎn)約法、最大似然法和貝葉斯法3種方法構(gòu)建的基因樹(shù)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基本一致。結(jié)果表明，狍是美洲鹿亞科中分化較早的類(lèi)群；在鹿科動(dòng)物4個(gè)亞科中獐是最為原始的種類(lèi)，其次是美洲鹿和麂，而鹿是進(jìn)化程度較高的類(lèi)型。 用人的SRY基因篩選出的一對(duì)引物成功對(duì)狍Sry基因進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)果顯示性別特異性。同時(shí)，本研究首次對(duì)狍S