大鼠胃粘膜損傷的隨齡變化.pdf

1、目的： 1、比較大鼠胃粘膜組織結(jié)構(gòu)和胃蛋白酶含量的隨齡變化。 2、應用阿司匹林及奧美拉唑制備老齡和非老齡大鼠的損傷和保護模型。比較損傷和保護因素對不同月齡大鼠胃粘膜和血液NO、TNF含量影響，并探討其作用機制。 方法：選擇月齡3個月，體重200-300g及月齡22個月，體重600-800g清潔級健康Wistar大鼠各18只，分別隨機分為3組：老齡、非老齡阿司匹林損傷組，老齡、非老齡奧美拉唑保護組和老齡、非老齡對照

2、組。 1、光鏡下觀察老齡、非老齡對照組大鼠胃粘膜腺體及肌層厚度，固有腺體數(shù)量及炎性細胞浸潤程度。胃蛋白酶試劑盒生化檢測胃粘膜組織胃蛋白酶活力。免疫組化方法檢測大鼠粘膜PCNA的表達。 2、老齡、非老齡阿司匹林損傷組大鼠分別用100mg/kg劑量阿司匹林灌胃；老齡、非老齡保護組大鼠分別用20mg/kg劑量奧美拉唑灌胃。老齡、非老齡對照組大鼠分別給予生理鹽水灌胃。處死前眼球內(nèi)眥靜脈取血并分離血漿和血清，檢測血漿NO含量、NO

3、S、iNOS及cNOS活力。放射免疫法測血清TNF含量。分別按Guth評分標準大體觀察及whittle評分標準光鏡下觀察，比較各組大鼠胃粘膜損傷情況。 結(jié)果： 1、老齡對照組大鼠胃粘膜色澤蒼白、表面光滑、皺襞規(guī)整、表面可見附著較多粘液。非老齡對照組大鼠胃粘膜色澤橘紅、表面光滑、皺襞規(guī)整、表面亦附著較多粘液。老齡和非老齡對照組大鼠胃體和胃竇粘膜均未見腸上皮化生、不典型增生及腫瘤的發(fā)生。老齡對照組大鼠胃竇粘膜固有層腺體數(shù)量減

4、少、腺體間隙增大，固有層腺體層數(shù)減少，甚至消失；非老齡對照組大鼠胃竇粘膜固有腺體飽滿清晰、層教較多。老齡對照組大鼠胃竇粘膜厚度高于非老齡大鼠的胃竇粘膜厚度，但老齡對照組大鼠胃體粘膜厚度與非老齡對照組大鼠胃體粘膜厚度相比無統(tǒng)計學意義。老齡對照組大鼠的胃竇、胃體的粘膜肌層較非老齡對照組大鼠的粘膜肌層增厚，鏡下可見粘膜肌層向粘膜固有層呈分支狀插入腺體之間。老齡對照組大鼠胃液PH值較非老齡對照組PH值略高，但兩者比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)

5、。老齡對照組大鼠胃粘膜組織的蛋白酶含量下降，與非老齡大鼠比較有統(tǒng)計學差別(P＜0.05)。非老齡對照組大鼠胃粘膜中PCNA陽性細胞主要定位于胃腺頸部增殖細胞帶，表達規(guī)律，細胞核染色陽性，粘膜表面上皮細胞為陰性。陽性信號較均一，呈顆粒樣或片狀棕黃色染色，有時胞漿也有輕度黃染或呈淡紫色。老齡對照組大鼠PCNA表達陽性細胞也呈顆粒狀或片狀棕黃色染色，陽性表達的胃頸腺增殖細胞帶厚度降低且位置下移，偏向于粘膜肌層。老齡對照組大鼠較非老齡對照組大鼠

6、NO、NOS、iNOS及TNF含量升高，cNOS含量下降，統(tǒng)計學差別明顯，這說明伴隨增齡，由cNOS產(chǎn)生的內(nèi)源保護性NO含量下降，而由iNOS產(chǎn)生NO含量升高，且后者升高的量大于前者下降的量，從而表現(xiàn)為總體NO含量升高。NO和TNF含量升高推測與老化后自由基產(chǎn)生過多或清除減少引起細胞結(jié)構(gòu)破壞而功能喪失，最終導致機體的衰老。 2、老齡和非老齡阿司匹林損傷組大鼠胃粘膜均可見散在點(線、片)狀出血點(帶)，老齡損傷組大鼠損傷面積大、范

7、圍廣，損傷指數(shù)高于非老齡大鼠損傷指數(shù)(P＜0.05)。鏡下觀察兩組損傷大鼠粘膜粘膜腺體有不同程度的充血、水腫、上皮缺損、連續(xù)性破壞，伴有不同程度的炎性滲出及炎癥細胞(中性粒、淋巴和單核細胞)浸潤。老齡損傷組大鼠鏡下whittle評分高于非老齡損傷組大鼠whittle評分(P＜0.05)。給予奧美拉唑預保護后再給予阿司匹林灌胃，兩保護組大鼠胃粘膜亦可見粘膜出血和糜爛，但損傷程度較相應的老齡和非老齡損傷組輕，糜爛及出血范圍減少，部分大鼠粘膜

8、僅見少量點狀出血。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)給予奧美拉唑保護后兩組大鼠粘膜充血水腫、上皮缺損破壞及炎性滲出、炎癥細胞浸潤程度均較單純損傷組程度輕。分別對老齡、非老齡對照組、損傷組及保護組大鼠進行組間分析發(fā)現(xiàn)：老齡、非老齡損傷組大鼠的TNF含量、NO含量、NOS活力及iNOS活力升高，cNOS活力下降，與對照組比較有統(tǒng)計學差別。老齡、非老齡保護組與相對應的阿司匹林損傷組比較，NO含量降低，但仍高于相應對照組的NO值(P＜0.05)；老齡和非老齡保護組N

9、OS活力低于損傷組，高于對照組，但統(tǒng)計學比較無明顯差別(P＞0.05)；老齡保護組iNOS活力較損傷組下降(P＜0.01)，較對照組升高(P＞0.05)，非老齡保護組iNOS活力較損傷組降低較對照組升高(P＜0.01)；老齡、非老齡保護組cNOS均較相應的損傷組升高(P＜0.05)較相應的對照組比較無統(tǒng)計學差別(P＞0.05)；老齡、非老齡保護組TNF含量較損傷組降低(P＜0.05)，但與對照組相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。胃粘膜損

10、傷指數(shù)與iNOS活力、NO含量及TNF含量呈正相關，相關系數(shù)分別為0.6871、0.7338、0.7824。胃粘膜損傷指數(shù)與cNOS活力呈負相關，相關系數(shù)為-0.7458。胃粘膜損傷指數(shù)與NOS活力無關。 結(jié)論： 1、老齡大鼠胃腺體萎縮、粘膜肌層增厚的發(fā)生率增加，胃蛋白酶原分泌減少，胃頸腺干細胞的增殖能力下降。 2、老齡大鼠胃粘膜對損傷的敏感性增加，修復能力下降。 3、阿司匹林通過降低cNOS活力，升高i