GR-G6PD比值法對(duì)G6PD缺乏癥雜合子診斷價(jià)值的探討.pdf

1、目的： 建立一種簡(jiǎn)便、可靠的G6PD缺乏癥雜合子生化檢測(cè)方法，并初步探討其在G6PD缺乏癥篩查中的診斷價(jià)值。 方法： 在排除地中海貧血、腫瘤、肝病、糖尿病和尿毒癥等疾患后，抽取248例非新生兒外周血標(biāo)本作G6PD酶活性和GR酶活性測(cè)定；自然或錯(cuò)配引物介導(dǎo)的聚合酶鏈反應(yīng)/限制性內(nèi)切酶分析130例女性G6PD基因G1376T、G1388A和A95G變異情況。對(duì)G6PD顯著缺乏的酶切陰性女性分析G6PD基因G871A位

2、點(diǎn)變異情況。用遺傳平衡定律計(jì)算雜合子的發(fā)生率，估計(jì)酶切加測(cè)序法檢出的雜合子在其中所占比例。ROC曲線(receiveroperator characteristic curve，受試者工作特征曲線)法確定G6PD酶直接法和GR/G6PD比值法的最佳工作點(diǎn)(optimal operating point,OOP)。以酶切結(jié)合測(cè)序的方法為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)G6PD酶直接法和GR/G6PD比值法對(duì)雜合子的診斷價(jià)值。各取G6PD酶活性正常、中度缺乏和

3、顯著缺乏的三個(gè)標(biāo)本作G6PD酶和GR酶的重復(fù)性測(cè)定，計(jì)算其變異系數(shù)。 結(jié)果： 本組G6PD酶直接法的參考值范圍為8.47～28.19IU/gHb，2.7～8.46/gHb為雜合子，≤2.6 IUJ/gHb為顯著缺乏。GR酶的正常值為8.44±2.84IU/gHb。109例男性中有14例G6PD缺乏，基因頻率為12.84％。用遺傳平衡定律進(jìn)行評(píng)估，139例女性中有32例患者(其中30例雜合子)；PCR/限制性內(nèi)切酶分析加測(cè)

4、序在130例女性中檢出24例雜合子。2例G6PD酶活性顯著缺乏的女性未能確定基因型。 G6PD酶直接法對(duì)雜合子的檢出率為26.92％，Youden指數(shù)為19.23％，調(diào)整一致率為62.34％。經(jīng)ROC曲線法確定GR/G6PD比值≥0.52為雜合子，此時(shí)GR/G6PD比值法對(duì)雜合子的檢出率為84.62％，Youden指數(shù)為49.04％，調(diào)整一致率為70.17％,ROC曲線下面積為0.766。經(jīng)配對(duì)卡方比較直接法和比值法對(duì)雜合子的診

5、斷價(jià)值，結(jié)合原始數(shù)據(jù)認(rèn)為GR/G6PD比值法對(duì)雜合子的診斷價(jià)值優(yōu)于G6PD酶直接法。經(jīng)ROC曲線法對(duì)G6PD酶直接法診斷臨界值進(jìn)行優(yōu)化，G6PD酶活性≤16.78IU/gHb為雜合子。優(yōu)化后其對(duì)雜合子的檢出率為84.62％，Youden指數(shù)為40.39％，調(diào)整一致率為66.57％，ROC曲線下面積為0.728。經(jīng)配對(duì)卡方比較直接法優(yōu)化前后對(duì)雜合子的診斷價(jià)值，結(jié)合原始數(shù)據(jù)認(rèn)為ROC曲線能夠顯著改善G6PD酶直接法對(duì)雜合子的靈敏度，但不能同

6、時(shí)兼顧特異度。 GR/G6PD比值法：ROC曲線下面積較G6PD直接法ROC曲線下面積大。G6PD酶和GR酶的重復(fù)性測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)大多在5％左右；只有G6PD酶活性顯著缺乏組的G6PD活性變異系數(shù)較大，但仍在顯著缺乏范圍。 結(jié)論： G6PD酶直接法對(duì)雜合子的檢出率很低，造成很大一部分的雜合子漏診。ROC曲線法能顯著改善G6PD酶活性直接法對(duì)雜合子的靈敏度，但無(wú)法兼顧特異度。GR/G6PD比值法對(duì)雜合子檢測(cè)的