湖北麥冬多糖對細(xì)胞和KKAy小鼠模型的抗糖尿病作用及機理研究.pdf

1、目的:研究湖北麥冬多糖對HepG2細(xì)胞、3T3-L1脂肪細(xì)胞和NIT-1細(xì)胞的體外抗糖尿病活性和對自發(fā)性2型糖尿病KKAy小鼠模型的治療作用及其作用機理。
　　方法:用MTT法檢測TLSP、LSP1和LSP2作用后的HepG2細(xì)胞、3T3-L1脂肪細(xì)胞和NIT-1細(xì)胞的活性和增殖情況。并檢測TLSP、LSP1和LSP2作用后對胰島素抵抗的HepG2和3T3-L1細(xì)胞模型的葡萄糖消耗量的影響。以及TLSP、LSP1和LSP2干預(yù)作用

2、后對NIT-1細(xì)胞的胰島素分泌量的影響。體內(nèi)試驗中,將2型糖尿病KKAy小鼠隨機分為模型對照組、羅格列酮組、TLSP、LSP1、LSP2,其中湖北麥冬幾種多糖有分別分為高中低劑量組(200、100、50mg/kg)。測定KKAy小鼠給藥前后的FBG、OGTT、FINS,并檢測HOMA-IR,以及TC、TG、HDL和LDL等指標(biāo)?？疾霻LSP、LSP1和LSP2對2型糖尿病KKAy小鼠模型的治療效果。并深入研究其抗糖尿病的作用機理,通過形

3、態(tài)學(xué)方法(HE染色法)、免疫組織化學(xué)檢測法(SP法)以及免疫蛋白印跡電泳法(Western Blot)這三種方式,觀察肝腎組織的病理學(xué)改變,并檢測與胰島素抵抗相關(guān)的主要幾個信號蛋白因子。取TLSP、LSP1和LSP2作用后的KKAy2型糖尿病小鼠的肝臟,檢測包括多糖對胰島素受體(InsR)、胰島素受體底物(IRS-1)以及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和過氧化物酶增殖物激活受體γ(PPARγ)等胰島素信號通路蛋白表達(dá),以評價湖北麥冬多

4、糖對各蛋白表達(dá)量的影響;同時再取KKAy小鼠肝臟組織,提取肝葡萄糖激酶(GK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)測定其活性,檢測肝糖原的含量,用來研究湖北麥冬多糖對各組2型糖尿病KKAy小鼠模型的肝糖代謝的影響。
　　結(jié)果:細(xì)胞實驗部分中,TLSP、LSP1和LSP2各劑量組對3種細(xì)胞活性基本沒有影響,說明其毒性可忽略不計,且不會影響細(xì)胞生長速率。TLSP、LSP1和LSP2可以增加胰島素抵抗的HepG2和3T3-L1細(xì)胞模型的

5、葡萄糖消耗量,還可以增加NIT-1細(xì)胞的胰島素分泌量。
　　體內(nèi)動物實驗部分中,TLSP、LSP1、LSP2的高、中劑量組都能顯著降低2型糖尿病KKAy小鼠的空腹血糖水平,能很大程度上改善糖尿病小鼠的葡萄糖耐受程度、降低FINS和HOMA-IR,說明湖北麥冬多糖能改善動物的胰島素抵抗的癥狀;并能顯著降低2型糖尿病KKAy小鼠的血脂水平,如總膽固醇(TC)和總甘油三脂(TG),雖然對HDL影響的效果并不明顯,但可以增加HDL/LDL

6、的相對比值。通過觀察形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)的結(jié)果顯示,湖北麥冬多糖各組能顯著提高InsR-α、IRS-1、PI3K和PPARγ等信號通路蛋白的蛋白表達(dá)。而通過肝糖代謝的實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)湖北麥冬多糖各組不僅能顯著增加GK活性,還能顯著降低G6Pase的活性,同時還能增加肝糖原的含量。
　　結(jié)論:TLSP、LSP1和LSP2在體內(nèi)體外實驗中均具有良好的抗糖尿病活性。它能治療并改善自發(fā)性2型糖尿病KKAy小鼠的高血糖、糖耐量、高胰島素血癥、胰島素抵