臍血干細(xì)胞對1型糖尿病小鼠的治療作用及機(jī)制.pdf

1、目的:建立1型糖尿病小鼠模型,研究臍血干細(xì)胞對1型糖尿病小鼠的治療作用,并探討其中的機(jī)制。
　　方法:健康3月齡健康雄性小鼠45只,所有小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為3組:正常組、模型組、治療組。治療組和模型組是經(jīng)尾靜脈一次性注射四氧嘧啶55mg/kg體重(BW),2h后給予5％葡萄糖灌胃預(yù)防反應(yīng)性低血糖的發(fā)生,3d后剪尾取血,微量血糖儀檢測空腹血糖,血糖≥16.7mmol/L為造模成功。造模成功后第5天治療組給予尾靜脈一次性注射

2、臍血干細(xì)胞,濃度為1×10^7/L,按照1ml/100g BW給藥[5]。模型組經(jīng)尾靜脈一次性注射同等體積的臍血干細(xì)胞緩沖液;正常組尾靜脈注射同等體積的生理鹽水。觀察各組小鼠的進(jìn)食,飲水,體重變化情況。并分別于第5、10、15天取各組小鼠尾靜脈血檢測血糖;實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,處死采血,采用放射免疫法檢測正常組、模型組及治療組小鼠血清胰島素、C肽水平,HE染色法觀察各組小鼠腎臟及胰腺形態(tài)學(xué)特點(diǎn),用Westen blot和PCR法檢測胰腺組織胰十二

3、指腸同源盒1(PDX-1)以及肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A基因(MafA)的表達(dá),并對條帶進(jìn)行相對光密度分析,免疫組化法檢測PDX-1、胰島素基因以及凋亡基因TUNEL的表達(dá)水平。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)以x±s表示,采用單因素方差分析,進(jìn)一步采用LSD法進(jìn)行多重比較,P<0.05為差異有顯著性。
　　結(jié)果:(1)各組大鼠一般情況
　　監(jiān)測各組小鼠第5、10、15天的進(jìn)食、飲水及體重情況,模型組小鼠進(jìn)食、飲

4、水量逐漸增加,體重逐漸減輕,與正常組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),治療組小鼠進(jìn)食、飲水逐漸下降,體重呈下降趨勢,與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而模型組小鼠血糖均有不同程度的升高,與正常組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),治療組小鼠血糖逐漸下降,第10、15天平均血糖水平與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　(2)各組小鼠血清C肽、胰島素水平水平
　　正常組、模型組、治療組胰島素值(

5、uIU/ml)分別為:13.04±1.40、8.74±1.20、11.81±0.90;C肽值(pg/ml)分別為:0.15±0.02、0.08±0.03、0.13±0.03。模型組小鼠血清胰島素、C肽水平顯著降低(P<0.01),分別為正常組的0.67和0.53倍;治療組大鼠血清胰島素、C肽分別上升至正常組的0.91和0.87倍,與正常組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(3)各組小鼠的腎臟、胰腺形態(tài)學(xué)表現(xiàn)
　　高倍鏡下觀察,正

6、常組小鼠腎臟腎小球形態(tài)規(guī)則、輪廓清晰,腎小管排列規(guī)則、形態(tài)飽滿;而模型組小鼠腎臟腎小球體積萎縮,囊腔消失,邊緣欠清,個(gè)別甚至呈玻璃樣變性,腎小管排列紊亂,少數(shù)管腔塌陷、變窄;治療組腎臟病變較模型組減輕,腎小球囊腔存在,邊緣尚清晰,腎小管形態(tài)尚完整。正常組小鼠胰腺胰島及其細(xì)胞數(shù)量豐富,胰島邊界清楚;而模型組小鼠胰島數(shù)量減少,邊界欠清,形態(tài)不規(guī)則,少數(shù)胰島可見融合;干細(xì)胞治療組胰島數(shù)量有所減少,但結(jié)構(gòu)尚清晰。
　　(4)Western

7、 blot和PCR法顯示各組小鼠胰腺組織PDX-1及MafA的表達(dá)變化
　　模型組小鼠胰腺組織PDX-1及MafA的表達(dá)水平較正常組明顯下降,治療組PDX-1及MafA表達(dá)升高,與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　(5)免疫組化法顯示各組小鼠胰腺組織PDX-1、胰島素以及TUNEL的表達(dá)變化
　　模型組小鼠胰腺組織PDX-1、胰島素的表達(dá)水平較正常組明顯下降,凋亡基因TUNEL表達(dá)升高,治療組PDX-1