人臍源性胰島前體細(xì)胞移植治療1型糖尿病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　評價hUMSCs在體外誘導(dǎo)為胰島前體細(xì)胞后治療T1D大鼠的效果。
　　方法:
　　1.分離、培養(yǎng)及鑒定hUMSCs；2.取第4代hUMSCs采用分階段聯(lián)合誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)并觀察誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)變化；3.分別取誘導(dǎo)后第7d、14d和21d細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光技術(shù)檢測Ngn3、胰島素和MafA表達(dá)；Western-blot法檢測誘導(dǎo)后第7d、14d和21d細(xì)胞MafA和Glut2蛋白表達(dá)；4.選擇正常雄性SD大鼠44只，

2、隨機(jī)分為誘導(dǎo)細(xì)胞組、干細(xì)胞組、模型組和正常組，正常組給予生理鹽水，余均給予鏈脲佐菌素腹腔注射建立T1D模型；5.將經(jīng)CM-DIL標(biāo)記的胰島前體細(xì)胞移植到糖尿病大鼠胰腺被膜下，實(shí)驗(yàn)周期為60天，分為2W、4W、6W、8W四個時間段，觀察各組血糖和體重變化情況；HE染色觀察大鼠胰島形態(tài)；Western-blot法檢測各時期各組MafA表達(dá)改變；分析移植后MafA和大鼠血糖相關(guān)性；分析MafA在干細(xì)胞組和誘導(dǎo)細(xì)胞組之間的表達(dá)差異性。
　

3、　結(jié)果:
　　1.成功分離培養(yǎng)出hUMSCs，誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)寬大、出現(xiàn)集落；2.免疫熒光技術(shù)檢測Ngn3、胰島素和MafA蛋白均為陽性表達(dá)；Western-blot檢測誘導(dǎo)后細(xì)胞MafA在正常組和7d時幾乎無表達(dá)，14d和21d組稍增高，Glut2在7d增高，14d時達(dá)高峰，21天時稍弱；3.共有38只大鼠成模，實(shí)驗(yàn)組大鼠血糖于第7天時升高；細(xì)胞移植后，干細(xì)胞組和誘導(dǎo)細(xì)胞組血糖均不同程度下降，但誘導(dǎo)細(xì)胞組降低更明顯，模型組仍維持在

4、高血糖狀態(tài)；模型組體重在整個實(shí)驗(yàn)過程中呈現(xiàn)持續(xù)降低，誘導(dǎo)細(xì)胞組和干細(xì)胞組體重均在第4周后呈升高趨勢；4. Western-blot法顯示移植后各組均能檢測到MafA表達(dá)且均呈升高趨勢，干細(xì)胞組在第6W時明顯升高，誘導(dǎo)細(xì)胞組在第4W時明顯升高；移植后MafA和血糖相關(guān)性兩組均呈負(fù)性相關(guān)；MafA在干細(xì)胞組和誘導(dǎo)細(xì)胞組之間的表達(dá)無差異性。
　　結(jié)論:
　　人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在微環(huán)境下誘導(dǎo)可誘導(dǎo)分化為胰島前體細(xì)胞，干細(xì)胞和胰島前體