不同移植部位異種胰島治療糖尿病的實驗研究.pdf

1、第一部分糖尿病BALB/c裸鼠模型的建立
　　目的：
　　研究單次大劑量注射STZ(鏈脲佐菌素)誘導(dǎo)1型糖尿病裸鼠(T1DM)模型的建立,探討如何提高建模成功率,進而建立穩(wěn)定的DM裸鼠模型,為后續(xù)相關(guān)實驗提供良好的前提和基礎(chǔ)。
　　方法：
　　健康BALB/c裸鼠,隨機分為兩組,對照組10只,模型組40只,其中雄性和雌性各20只,6-8周齡,體重在20克左右。模型組按200-250mg/kg體重劑量單次腹腔注射S

2、TZ液,對照組予等劑量無菌生理鹽水腹腔注射,注射后隔天通過尾靜脈采血測定兩組小鼠血糖值,同時記錄造模后小鼠體重變化,注藥誘導(dǎo)后在不同時間段連續(xù)兩次測定血糖水平>16.7mmol/L(300mg/dl)被認為是誘導(dǎo)糖尿病成功。在注藥后1周取模型小鼠的胰腺組織,用甲醛固定后石蠟切片,HE染色,進一步觀察模型小鼠胰島組織的病理改變。
　　結(jié)果：
　　模型組注藥后測得血糖水平(19.78±4.12mmol/L)明顯高于注藥前水平(4

3、.17±1.46mmol/L),差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。而對照組注藥前后血糖變化不明顯,差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>O.05)。模型組注藥前體重為(21.4±2.3g),造模后(18.3±2.1g),小鼠體重降幅明顯(P<0.05)。而對照組小鼠的體重水平無明顯變化。小鼠經(jīng)STZ誘導(dǎo)成功造模后,其胰島組織出現(xiàn)了不同程度的萎縮,胰島數(shù)量明顯減少,胰島內(nèi)不同程度的炎性細胞浸潤,以淋巴細胞為主。
　　結(jié)論：
　　單次大劑量注射

4、STZ可成功誘導(dǎo)裸鼠T1DM模型,是較理想的進行糖尿病相關(guān)研究的動物模型。造模成功率及穩(wěn)定性與性別有關(guān),雄性鼠較雌性成模率高,穩(wěn)定性好。20克以上雄性小鼠是用于造模的首選。
　　第二部分不同部位的胰島移植
　　目的：
　　通過分離純化得到活性優(yōu)良的豬胰島,將其用于糖尿病裸鼠(T1DM)模型的異種移植。分別在裸鼠的肝內(nèi)、腎包膜下、網(wǎng)膜袋及腹腔等不同部位進行移植,探討一個更理想的移植部位。
　　方法：
　　選擇

5、五指山小型豬作為供體取得胰腺,膠原酶V灌注消化后應(yīng)用淋巴細胞分離液分離純化胰島,通過DTZ染色鑒定,高低糖刺激試驗判定胰島功能及活性。選擇T1DM裸鼠模型,將分離純化的胰島分別移植到肝內(nèi)、腎包膜下、網(wǎng)膜袋及腹腔四個部位,用血糖儀檢測DM模型的血糖值,比較不同部位胰島異種移植的效果。
　　結(jié)果：
　　分離純化后的胰島被染成猩紅色,結(jié)構(gòu)完整,為橢圓或類圓形,純度較高。移植術(shù)后經(jīng)過圍手術(shù)期而存活下來的受體裸鼠中,大部分都有不同程度

6、的血糖下降,但降至正常血糖水平(<11.2mmol/L)并能維持(認為移植有效)的裸鼠數(shù)量有差異。移植后各組降糖成功率為:門靜脈肝內(nèi)移植組:42.9％(3/7),腎包膜下移植組:60.0%(6/10),腹腔移植組:18.2%(2/11),網(wǎng)膜袋移植組:80.0%(8/10)(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　通過密度梯度離心法可獲得活性良好純度較高的胰島;將胰島移植到肝內(nèi)、網(wǎng)膜袋、腎包膜、腹腔內(nèi)均有降糖效果,其中網(wǎng)膜袋移植降