兩株功能阻斷型CD154單克隆抗體的生物學(xué)特性及其應(yīng)用研究.pdf

1、第一部分 Anti-CD154 mAb 1B1和4F1在體外同種反應(yīng)中的生物學(xué)特性研究 移植排斥體外基礎(chǔ)研究的主要方法之一是混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR).MLR是來(lái)源于不同個(gè)體的淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng),供體細(xì)胞表面HLA-Ⅱ類(lèi)抗原以及表達(dá)的共刺激分子可活化受體T淋巴細(xì)胞,活化的T淋巴細(xì)胞發(fā)生分化、增殖并產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng).該研究應(yīng)用anti-CD154 mAb 1B1和4F1阻斷MLR中CD40-CD154信號(hào),通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)上清的細(xì)胞因

2、子(IL-2、IFN-γ)水平、CD4<'+>T淋巴細(xì)胞的增殖及其表型變化等指標(biāo),從而觀察1B1和4F1阻斷CD40-CD154信號(hào)在介導(dǎo)同種抗原的低反應(yīng)性和誘導(dǎo)特異性免疫耐受中的作用.移植對(duì)移植物的損害主要包括兩種:非同種抗原依賴(lài)的局部缺血/再灌注和同種抗原依賴(lài)的急性和慢性排斥反應(yīng).這兩種損害的共同特征是移植物血管內(nèi)皮細(xì)胞的活化和白細(xì)胞對(duì)移植物的浸潤(rùn).活化的血管內(nèi)皮細(xì)胞(ECV)可能通過(guò)上調(diào)表達(dá)某些膜分子,分泌細(xì)胞因子和趨化因子介導(dǎo)炎

3、癥反應(yīng).顯然移植物的血管內(nèi)皮細(xì)胞首先是作為同種抗原與宿主T細(xì)胞相互作用,介導(dǎo)T細(xì)胞的同種反應(yīng).該研究通過(guò)高表達(dá)CD40分子的血管內(nèi)皮細(xì)胞和CD4<'+>T細(xì)胞的體外共培養(yǎng),以阻斷型anti-CD154 mAb 1B1和4F1為手段,觀察CD40-CD154信號(hào)介導(dǎo)的CD4<'+>T細(xì)胞在移植排斥中的作用及相關(guān)機(jī)制.第二部分 可溶性CD154酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒的研制及其應(yīng)用 某些自身免疫疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的血清sCD154水平異常升高,

4、由此推測(cè),可能是來(lái)源于活化的CD4<'+>T細(xì)胞表達(dá)的膜型CD154通過(guò)蛋白質(zhì)水解作用形成的sCD154.業(yè)已證實(shí),在炎癥反應(yīng)中,血小板在活化的數(shù)分鐘內(nèi)就高表達(dá)CD154分子.當(dāng)它與炎癥部位的血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表面的CD40分子相互作用,能介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng).CD40-CD154相互作用的數(shù)分鐘至1小時(shí)內(nèi),膜型CD154分子通過(guò)蛋白質(zhì)水解形成sCD154.此外,某些血小板活化劑如腎上腺素、凝血酶活化的血小板亦表達(dá)

5、CD154分子并釋放出sCD154.血清sCD154水平與血小板的數(shù)量和血小板的活化程度成正相關(guān).研制sCD154酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒能為某些自身免疫性疾病和血小板相關(guān)性疾病的輔助診斷、療效估價(jià)和預(yù)后判斷提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)室參數(shù),并為探討其發(fā)病機(jī)理提供有效的手段.結(jié)論:成功建立雙抗體夾心sCD154的酶聯(lián)檢測(cè)方法,該檢測(cè)方法具有較好的穩(wěn)定性、較高的準(zhǔn)確性和靈明度.首次發(fā)現(xiàn)血清sCD154水平高于血漿,活化的血小板或活化的CD4<'+>T細(xì)胞膜型