鼠抗人Sydecan-1(CD138)單克隆抗體的研制及生物學(xué)特性的研究.pdf

1、蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文鼠抗人Sydecan1(CD138)單克隆抗體的研制及生物學(xué)特性的研究姓名：孫萬平申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：張學(xué)光2002.5.1墊叁型竺竺：!苧塞墮墊竺盟型墨墨基生竺堂絲墼里塞一——————!!至，Sydecan1分子的表達(dá)對腫瘤細(xì)胞的作用。f實(shí)驗(yàn)方法：(1)以高表l達(dá)人Sydecan一1分子的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株8226為免疫原，免疫Balb／C小鼠；(2)采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)將免疫的小鼠脾臟細(xì)胞

2、與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2／0融合；(3)通過間接免疫熒光標(biāo)記對雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行篩選：(4)mAb識(shí)別抗原位點(diǎn)的競爭抑制實(shí)驗(yàn)測定mAb與PE直標(biāo)單抗的位點(diǎn)的關(guān)系；(5)采用常規(guī)方法制備染色體，對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行核型分析；(6)采用免疫親和層析法對腹水型mAb進(jìn)行純化；(7)快速試紙鑒定mAbIg類型；(8)采用間接免疫熒光標(biāo)記法測定單克隆抗體的效價(jià)；(9)單克隆抗體對骨髓瘤細(xì)胞XGI、XG一2的生長抑制試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：獲得一株鼠抗人Sydec

3、an1分子的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，命名為483，其染色體數(shù)大于100條，經(jīng)體外長期傳代培養(yǎng)，液氮凍存半年以上反復(fù)復(fù)蘇良好，分泌特異性抗體性能穩(wěn)定。483分泌的mAb識(shí)別位點(diǎn)與兩種單抗BB4和M15識(shí)別位點(diǎn)相同或相近，重鏈屬IgGl亞類，輕鏈為K型，純化后腹水中mAb蛋白的得率為29mg／ml，加入483mAb后的XG一1、XG一2細(xì)胞體外生長受到抑制，由此表明，483為功能性抗人sydecan—l單克隆抗體，這對研究sydecani分