鼠抗人B7-2單克隆抗體的研制及應(yīng)用研究.pdf

1、目的 建立穩(wěn)定分泌鼠抗人B7-2分子單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株：研究抗體的生物學(xué)特性及功能；建立人可溶性B7-2分子的ELISA檢測(cè)方法。 方法 應(yīng)用B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)建立分泌抗人B7-2單抗的雜交瘤細(xì)胞株；快速定性試紙法鑒定單抗的亞類；體內(nèi)誘生腹水法制備單抗；免疫親和層析法純化抗體；間接免疫熒光法分析單抗對(duì)細(xì)胞膜型B7-2分子的識(shí)別：MTT法檢測(cè)單抗對(duì)Daudi的生長(zhǎng)抑制和對(duì)PBTCs增殖的抑制作用；競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)分

2、析單抗識(shí)別的抗原位點(diǎn)。生物素標(biāo)記抗體后建立可溶性B7-2分子的ELISA檢測(cè)方法。 結(jié)果 獲取一株穩(wěn)定分泌抗人B7-2分子單抗的雜交瘤，命名為6A5：快速定性試紙法鑒定6A5屬小鼠IgGl亞類及K型；經(jīng)體內(nèi)誘生腹水法制備單抗，小鼠腹水形成的陽(yáng)性率約為80％，腹水的收獲量平均為5．9ml／只小鼠；經(jīng)免疫親和層析法純化，腹水中抗體蛋白的得率為1．1mg／ml：?jiǎn)慰?A5與L929-B7-2、PBTCs、Raji、MCF-7和

3、Daudi的陽(yáng)性結(jié)合率分別為99．9％、4．6％、90．6％、79．6％和99．1％；將6A5(終濃度為5μg/ml)加入到Daudi細(xì)胞的培養(yǎng)體系中，經(jīng)顯微鏡觀察及MTT法分析，6A5對(duì)Daudi細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制作用。以絲裂霉素處理的L929-B7-2為刺激細(xì)胞，PBTCs為反應(yīng)細(xì)胞，加入6A5共同培養(yǎng)：經(jīng)MTT法分析，6A5能阻斷B7-2介導(dǎo)的協(xié)同刺激信號(hào)，抑制PBTCs增殖：通過Biotin標(biāo)記B7-2單抗，建立了人sB7-2分