腫瘤相關抗原CD98的單克隆抗體制備及其功能研究.pdf

1、惡性腫瘤是世界范圍內主要致死性疾病之一。傳統(tǒng)治療手段在臨床上無法根治惡性腫瘤且伴有毒副作用。近幾十年來，通過對腫瘤分子機制不斷的深入研究，針對癌癥的發(fā)生中起關鍵作用的靶分子及其調控的信號轉導通路的特異性分子的靶向治療，引發(fā)抗癌治療理念的變革。分子靶向治療作為腫瘤治療的新策略，因具有特異性、選擇性強，副作用小等治療優(yōu)勢，逐漸被應用并在臨床取得了成功。精準靶點的確定是分子靶向治療策略的關鍵，也是研究攻克腫瘤的主要難點。目前已有多種單克隆抗體

2、作為腫瘤分子靶向藥物進入臨床或市場，結果顯示該類大分子靶向藥物具有較好的反應療效，同時具有較輕甚至沒有藥物的不良反應。
　　腫瘤相關分子（Tumor associated molecule，TAM）CD98是近年來報道較多的跨膜糖蛋白分子。研究顯示，CD98分子在不同種類的惡性腫瘤中呈現(xiàn)異常表達，并且參與腫瘤發(fā)生，增殖以及代謝等多種生物學事件，而通過干涉、敲除、阻斷等方式抑制CD98的異常表達后，可以腫瘤的惡性表型有所好轉。本研究

3、旨在基于人源轉基因小鼠篩選出靶向人CD98（CD98hc,SLC3A2）的人源單抗，對其親和力、特異性級進行鑒定并對單抗的抗腫瘤功能進行探索。
　　本課題主要包括以下三部分工作：
　　第一部分，CD98分子作為抗體靶向治療靶點的確定。
　　我們通過十種發(fā)病率和致死率較高腫瘤的組織芯片，713例腫瘤組織樣本和260例癌旁或正常組織樣本，經免疫組織化學及免疫熒光實驗，統(tǒng)計學分析結果提示：CD98是一種腫瘤相關的生物標志（B

4、iomaker）。此外，通過100對結腸癌及癌旁組織預后分析，CD98的高表達與結腸癌不良預后有關，可作為一個獨立預后因素。
　　第二部分，人源抗體轉基因小鼠篩選靶向CD98全人源抗體。
　　首先，我們構建了CD98抗原的原核系統(tǒng)表達，之后用轉人抗體基因小鼠篩選獲得靶向CD98全人源抗體的細胞系，具體方法是：通過全人抗體轉基因小鼠進行目標抗原CD98的免疫并進行雜交瘤篩選和制備穩(wěn)定的單克隆抗體高表達細胞株。通過此方法我們獲得

5、了四株表達靶向CD98人源抗體的細胞株。
　　第三部分，對所獲得的靶向CD98人源抗體的鑒定及其抑瘤作用及功能機制。
　　這一部分研究中，我們用ELISA間接法，Western Blot,免疫組織化學等試驗對表達抗CD98的人源抗體CD98-1，CD98-2，CD98-3，CD98-4的親和力及特異性鑒定，結果顯示這四株抗體能和細胞及組織中表達的 CD98特異結合且親和力較好；所制備的抗體均能與原核表達的 CD98相互作用。