細粒棘球蚴重組鐵蛋白和重組mMDH的免疫保護性差異機制的研究.pdf

1、目的:通過對具有免疫保護力的重組鐵蛋白和不具有免疫保護力的重組mMDH蛋白的比較分析，從而找出小鼠被疫苗免疫后產(chǎn)生免疫保護和抗細粒棘球蚴的機制，為疫苗的廣泛應用提供理論依據(jù)。方法：（1）實驗動物分組：選取雌性ICR小鼠隨機分為3組：rEg.ferritin免疫組、rEg.mMDH免疫組和對照組；（2）動物免疫：rEg.ferritin和rEg.mMDH免疫組小鼠分別注射10μg重組抗原+佐劑＋PBS，100μl，共三次，每次間隔兩周，對

2、照組注射100μlPBS；（3）動物攻擊感染：第3次免疫后2周，各組均以1500個活的原頭蚴/每只小鼠攻擊感染；（4）免疫保護力觀察：攻擊感染20周后剖殺小鼠，統(tǒng)計小鼠腹腔內(nèi)包囊數(shù)量和直徑，計算免疫保護力。（5）脾細胞懸液的制備：剖殺小鼠，無菌取脾，分離脾細胞；（6）用分離得到的脾細胞，應用FCM檢測CD4+和CD8+T細胞亞群的百分比變化。（7）用MTT法檢測脾淋巴細胞增殖情況。（8）獲得數(shù)據(jù)后對具有免疫保護力和不具有免疫保護力的兩組

3、進行對照比較，分析其內(nèi)在機制。結果：（1）根據(jù)Dempster公式計算：rEg.ferritin抗原免疫ICR小鼠可獲得86.37％的免疫保護力，而rEg.mMDH抗原免疫ICR小鼠未獲得免疫保護力，提示rEg.ferritin具有疫苗的潛質(zhì)，而rEg.mMDH則無。（2）免疫組與對照組經(jīng)統(tǒng)計學檢驗比較：①rEg.ferritin免疫組小鼠在剖殺前CD4+T細胞增加（P﹤0.01），CD8+T細胞無明顯變化（P﹥0.05），而rEg.m

4、MDH免疫組小鼠脾淋巴細胞亞群與對照組相比無明顯變化，提示rEg.ferritin免疫小鼠的保護機制有CD4+T細胞的參與，CD8+T細胞的作用不是很大；②MTT法檢測證實rEg.ferritin免疫的小鼠在rEg.ferritin刺激下脾淋巴細胞增殖水平明顯高于對照組（P<0.01），而rEg.mMDH無明顯作用（P﹥0.05），提示rEg.ferritin抗原免疫小鼠的保護機制可能與其刺激脾淋巴細胞增殖有關。結論：rEg.ferri