細(xì)粒棘球蚴重組抗原Eg10和mMDH致樹突狀細(xì)胞免疫耐受的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　初步明確細(xì)粒棘球蚴重組抗原Eg10和mMDH免疫小鼠產(chǎn)生的免疫耐受機(jī)制。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞（Dendritic cell，DC），用Eg10和mMDH體外刺激DCs，通過掃描電鏡觀察DCs的形態(tài)變化，細(xì)胞免疫熒光觀察DCs表達(dá)吲哚胺2,3雙加氧酶（Indoleamine2,3-dioxygenase，IDO）的水平；
　　2.利用IDO抑制劑1-甲基色氨酸（1-Me

2、thyl-tryptophan，1-MT）處理DCs3h，用來抑制IDO的表達(dá)及酶活性，然后用重組抗原Eg10和mMDH體外刺激DCs，通過混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測(cè)DCs刺激CD4+T細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T cell，Treg）生成的能力；Q-PCR檢測(cè)DCs中多種細(xì)胞因子的表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)DC表面分子CD80/CD86、MHCII、CD40的表達(dá)情況。
　　結(jié)

3、果：
　　1.重組抗原Eg10和mMDH不能刺激DCs表面樹突的生成，DCs呈現(xiàn)不成熟狀態(tài)；
　　2.重組抗原Eg10和mMDH刺激DCs后，IDO的表達(dá)增強(qiáng)，上清中犬尿氨酸的含量也升高，且1-MT能特異性降低IDO的表達(dá)水平和酶活性；
　　3.與1-MT未處理的mMDH組相比，1-MT處理的mMDH組中DCs刺激CD4+T細(xì)胞增殖的能力升高，誘導(dǎo)CD4+CD25+FOXP3+Tregs生成的能力降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

4、；而Eg10組對(duì)1-MT的反應(yīng)不明顯；
　　4.重組抗原Eg10和mMDH刺激DCs后，TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA水平的表達(dá)呈不同程度的升高，1-MT處理的抗原組TNF-αmRNA表達(dá)升高，IL-6、IL-10 mRNA表達(dá)降低；
　　5.重組抗原Eg10和mMDH刺激DCs后，細(xì)胞表面分子的表達(dá)水平較低，1-MT處理并不能提高表面分子的表達(dá)水平。
　　結(jié)論：
　　1.細(xì)粒棘球蚴重組抗原Eg10和