自然感染細(xì)粒棘球蚴對(duì)腸道粘膜免疫屏障的影響研究.pdf

1、由細(xì)粒棘球絳蟲的幼蟲引起的棘球蚴病，是一種人畜共患的寄生蟲病，高發(fā)于我國(guó)及世界各地的畜牧區(qū)，分布地域相當(dāng)廣闊，目前已成為全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題。人類及部分食草類動(dòng)物（如綿羊等）因?yàn)檎`食了由其終末宿主排出的蟲卵成為其中間宿主，蟲卵經(jīng)過(guò)胃，最終在十二指腸及小腸上段腸粘膜內(nèi)寄居，在此蟲卵孵化出六鉤蚴，穿過(guò)腸粘膜屏障入血并到達(dá)肝臟及其他器官，對(duì)機(jī)體的健康危害極大。既往研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)粒棘球蚴之所以能夠在機(jī)體內(nèi)長(zhǎng)期生存，是其通過(guò)影響宿主Th1及Th2兩

2、型細(xì)胞免疫應(yīng)答平衡因子，誘導(dǎo)非保護(hù)性的Th2型免疫應(yīng)答成為主導(dǎo)，利于細(xì)粒棘球蚴在體內(nèi)的生長(zhǎng)。但是，腸粘膜免疫屏障系統(tǒng)是機(jī)體內(nèi)最大的淋巴免疫系統(tǒng)，是細(xì)粒棘球蚴進(jìn)入機(jī)體的第一道屏障，其對(duì)腸粘膜免疫屏障影響的相關(guān)研究鮮有報(bào)道。
　　目的：
　　本研究旨在通過(guò)自然感染細(xì)粒棘球蚴的綿羊做為大動(dòng)物研究對(duì)象，采取隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)及免疫組化等方法，分析Th1/Th2相關(guān)的部分免疫因子(IL-6，IL-10及I

3、FN-γ)在外周血和小腸粘膜組織內(nèi)的水平變化;同時(shí)，應(yīng)用阿苯達(dá)唑質(zhì)脂體治療自然感染細(xì)粒棘球蚴感染的綿羊，進(jìn)一步評(píng)價(jià)細(xì)粒棘球蚴感染后對(duì)外周血及腸粘膜內(nèi)Th1/Th2所介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的影響;此外，通過(guò)對(duì)肝細(xì)粒棘球蚴患者與正常人群中幽門螺桿菌感染率的進(jìn)行病例對(duì)照研究，以期從腸道微生態(tài)角度來(lái)探討，腸道微生態(tài)變化對(duì)細(xì)粒棘球蚴影響腸粘膜免疫屏障功能可能起到的作用。最終來(lái)研究，自然感染細(xì)粒棘球蚴對(duì)腸道粘膜免疫屏障可能發(fā)生的影響，為今后預(yù)防和治療細(xì)粒棘

4、球蚴感染提供可行性研究方向。
　　方法:
　　用B超初檢和CT復(fù)檢的方法，從新疆巴音布魯克草原986只綿羊中，篩選出年齡在24-36月左右，自然感染細(xì)粒棘球蚴的雌性綿羊20只，按隨機(jī)數(shù)字表法，分為兩組，分別為使用阿苯達(dá)唑治療組和細(xì)粒棘球蚴感染組，以及按同法篩選出未感染組綿羊10只，做為正常對(duì)照組。嚴(yán)格隨機(jī)三盲方法，對(duì)上述三組實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行治療及飼養(yǎng)3月后，進(jìn)行外周血采集、處死后小腸粘膜標(biāo)本收集。用ELISA法對(duì)外周血中IL-6

5、，IL-10及IFN-γ等免疫因子水平進(jìn)行測(cè)定，分析細(xì)粒棘球感染及阿苯達(dá)唑質(zhì)脂體治療后外周血中免疫因子的變化;同時(shí)通過(guò)對(duì)小腸粘膜石蠟切片進(jìn)行免疫組化染色，比較IL-6，IL-10及IFN-γ等免疫因子的陽(yáng)性表達(dá)水平;此外，通過(guò)隨機(jī)選取臨床確診感染細(xì)粒棘球蚴患者51例及正常健康體檢人群30例成人做為對(duì)照組，使用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)幽門螺桿菌感染情況，進(jìn)一步探討，腸道微生態(tài)對(duì)細(xì)粒棘球蚴作用于腸粘膜免疫屏障過(guò)程中的可能影響。
　　結(jié)果:

6、>　　1）ELISA法對(duì)自然感染細(xì)粒棘球蚴綿羊外周血免疫因子IL-6、IL-10、IFN-γ進(jìn)行測(cè)定提示:感染組上述3種免疫因子水平均高于對(duì)照組，但只有IL-10具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001);免疫組化法對(duì)自然感染細(xì)粒棘球蚴綿羊腸粘膜內(nèi)免疫因子IL-6、IL-10、IFN-γ進(jìn)行測(cè)定提示:感染組僅有IFN-γ明顯高于對(duì)照組，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.005);
　　2）阿苯達(dá)唑脂質(zhì)體治療干預(yù)后，ELISA法測(cè)定外周血Th2相關(guān)免疫

7、因子IL-6，IL-10均有降低，但僅有IL-10具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);阿苯達(dá)唑脂質(zhì)體治療后，腸粘膜免疫組化結(jié)果示:腸粘膜內(nèi)Th1相關(guān)免疫因子IFN-γ保持在較高水平，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜.01），腸粘膜內(nèi)Th2相關(guān)免疫因子IL-10有所降低，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.893);
　　3）用化學(xué)發(fā)光法對(duì)51例細(xì)粒棘球感染患者進(jìn)幽門螺桿菌抗體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性率達(dá)74.51％，而對(duì)照組為50.00％，兩者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0

8、.025)。
　　結(jié)論:
　　本研究利用自然感染細(xì)粒棘球蚴綿羊做為研究對(duì)象，更接近同樣做為細(xì)粒棘球感染中間宿主的人類感染模式。研究發(fā)現(xiàn)，自然感染細(xì)粒棘球蚴綿羊外周血中免疫反應(yīng)主要以Th2型為主，而腸粘膜免疫反應(yīng)可能以Th1型為主;行阿苯達(dá)唑質(zhì)脂體進(jìn)行干預(yù)治療后結(jié)果提示:阿苯達(dá)唑質(zhì)脂體可增強(qiáng)機(jī)體體液及腸粘膜免疫屏障的Th1型免疫反應(yīng)，對(duì)Th2類免疫因子有抑制作用;在對(duì)人細(xì)粒棘球蚴感染與幽門螺桿菌感染相關(guān)性病例對(duì)照研究結(jié)果提示: