Nrf2信號通路抑制后對細粒棘球蚴原頭節(jié)生長的影響.pdf

1、目的：
　　本實驗以體外培養(yǎng)的細粒棘球蚴原頭節(jié)為研究對象，觀察維甲酸（RA）對細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi)Nrf2信號通路的抑制作用，并進一步探討Nrf2信號通路抑制后體外對細粒棘球蚴原頭節(jié)的作用。
　　方法：
　　無菌條件下，從自然感染細粒棘球蚴病的綿羊肝臟中獲取細粒棘球蚴原頭節(jié)，并置RPMI1640培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)。將不同濃度的RA（2、4、6、8和10μmol/L）體外作用于細粒棘球蚴原頭節(jié)，并設(shè)立空白對照組。采用共聚焦免

2、疫熒光技術(shù)檢測原頭節(jié)內(nèi)Nrf2的定位及表達變化；通過WST法及ELISA法測定RA作用后原頭節(jié)GST及HO-1的活性變化。各組原頭節(jié)經(jīng)0.1％伊紅溶液染色后于光鏡下觀察活力及形態(tài)變化，實驗獨立重復(fù)3次，并繪制活力曲線。用掃描電子顯微鏡（SEM）觀察原頭節(jié)表面超微結(jié)構(gòu)改變。不同濃度RA作用原頭節(jié)24h、48h后，用caspase-3檢測試劑盒檢測caspase-3酶活性。
　　結(jié)果：
　　免疫熒光定位表明Nrf2綠色熒光主要分

3、布于細粒棘球蚴原頭節(jié)的細胞質(zhì)中，8μmol/LRA作用后，綠色熒光強度及定位均未見明顯改變。RA作用后的原頭節(jié)GST和HO-1活性均顯著下降（P<0.05），且呈時間及劑量依賴性。不同濃度RA均有抑制原頭節(jié)生長的作用，以8μmol/L和10μmol/LRA對原頭節(jié)殺傷作用較明顯，至培養(yǎng)第5d，8μmol/L組原頭節(jié)活力僅為9.58%，而10μmol/L組原頭節(jié)已全部死亡。隨著藥物作用時間的延長，RA對原頭節(jié)的殺傷作用越明顯。SEM觀察顯

4、示， RA可明顯破壞原頭節(jié)表面超微結(jié)構(gòu)，引起蟲體表層塌陷、頂突變形及微毛脫落，當(dāng)藥物濃度及作用時間增加后，損傷加重，出現(xiàn)頂突界面缺損、吸盤變形，體表還可見大量蟲蝕樣改變及指狀突起。此外，不同濃度RA作用原頭節(jié)24h、48h后，caspase-3酶活性較正常對照組顯著增高（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.維甲酸可有效抑制細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi)Nrf2調(diào)控的下游GST、HO-1的活性，但對Nrf2的表達水平?jīng)]有影響。