MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在細(xì)粒棘球蚴生長及凋亡中的作用.pdf

1、細(xì)粒棘球蚴?。倚桶x?。┦且环N危害嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病，是由人和中間宿主感染細(xì)粒棘球絳蟲中絳期的蟲卵和孕節(jié)片所致，據(jù)估算新疆全區(qū)現(xiàn)有包蟲病患者15萬例以上，新疆每年因患包蟲病而接受手術(shù)者達(dá)2000人次以上。
　　目前肝包蟲病的治療主要以外科手術(shù)治療為主，由彭心宇教授首創(chuàng)的“閉合式肝包蟲外膜內(nèi)外囊完整切除術(shù)”，被認(rèn)為是治療肝包蟲的首選術(shù)式，已經(jīng)寫入新版WHO包蟲病防治指南。但是，當(dāng)包蟲體積較大，或臨近重要臟器及管道時(shí)，需選擇開放

2、式外膜內(nèi)外囊切除術(shù)，此時(shí)原頭節(jié)可能會有的溢出和殘留，需要局部使用藥物進(jìn)行囊內(nèi)滅活，預(yù)防包蟲術(shù)后復(fù)發(fā)。目前臨床使用的肝包蟲局部化療藥物為阿苯達(dá)唑、雙氧水、酒精和高滲鹽水等，它們雖然可以殺滅部分頭節(jié)，但是作用效果不盡理想，并且對周圍肝組織有一定的破壞作用。尋找術(shù)中短時(shí)間內(nèi)安全有效的殺滅原頭蚴的局部化療藥物，防止術(shù)中頭節(jié)播散及術(shù)后復(fù)發(fā)，滿足臨床治療包蟲病的需要，已成為一項(xiàng)急需解決的重要課題。
　　絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路是

3、多種生物中具有的能介導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)。主要包括三條信號經(jīng)典通路，即ERK信號通路、P38信號通路和JNK信號通路。多種疾病和腫瘤的發(fā)生與MAPK信號通路密切相關(guān)。泡狀棘球蚴和血吸蟲等寄生蟲疾病發(fā)生均與MAPK信號通路有關(guān)，泡狀棘球蚴原頭節(jié)可激活P38信號通路。然而，MAPK信號傳導(dǎo)通路，是否參與細(xì)粒棘球蚴的發(fā)病，干擾此細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路，是否可以抑制細(xì)粒棘球蚴的生長，目前國內(nèi)外尚未見報(bào)道。
　　本研究第一部分主要針對MA

4、PK信號通路中的ERK通路，以體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)為研究對象，應(yīng)用免疫印記方法，在證實(shí)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)存在ERK信號通路的基礎(chǔ)上，將不同濃度ERK抑制劑PD98059（0、12.5、25、50、100μM）作用于體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)，0.1％伊紅排斥實(shí)驗(yàn)檢測原頭節(jié)的活力，不同濃度PD98059對原頭節(jié)均有抑制作用，隨著作用時(shí)間的延長和藥物濃度的增加，PD98059對原頭節(jié)的生長抑制作用增強(qiáng)；將50μM和100μM PD980

5、59作用于細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)3d和5d，掃描電鏡和透射電鏡觀察原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)的變化，PD98059可以破壞原頭節(jié)表面和內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)；將50μM PD98059作用細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)不同時(shí)間（24h、48h、72h），檢測Caspase-3酶活性，隨著PD98059作用時(shí)間延長，Caspase-3酶活性增加；將50μM PD98059作用細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)1d和7d，檢測TUNEL活性，結(jié)果顯示，細(xì)胞凋亡指數(shù)分別為11.8士5.5%和85.4士

6、2.7%。
　　本研究第二部分主要針對MAPK信號通路中的P38通路，以體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)為研究對象，應(yīng)用免疫印記方法，在證實(shí)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)存在P38信號通路的基礎(chǔ)上，將不同濃度P38抑制劑SB202190（0、10、20、40、80μM）作用于體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)，0.1%伊紅排斥實(shí)驗(yàn)檢測原頭節(jié)的活力，不同濃度SB202190體外作用細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)均有抑制作用，隨著時(shí)間的延長，SB202190對原頭節(jié)的抑制作用

7、增強(qiáng)；SB202190作用原頭節(jié)不同時(shí)間，掃描和透射電鏡觀察原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)的變化，SB202190可以破壞原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)；40μM SB202190作用細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)，用Caspase-3試劑盒檢測Caspase-3活性，TUNEL試劑盒檢測TUNEL活性，結(jié)果顯示，40μM SB202190可以激活Caspase-3酶活性和TUNEL活性，證實(shí)SB202190可以通過激活原頭節(jié)的凋亡，抑制原頭節(jié)的生長。
　　本研究第三部分主要

8、針對MAPK信號通路中的JNK通路，以體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)為研究對象，應(yīng)用免疫印記方法，在證實(shí)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)存在JNK信號通路的基礎(chǔ)上；將不同濃度JNK抑制劑SP600125（0、15、20、25、30、35μM）作用于體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)，0.1%伊紅排斥實(shí)驗(yàn)檢測原頭節(jié)的活力，不同濃度SP600125體外作用細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)均有抑制作用，隨著時(shí)間的延長，SP600125對原頭節(jié)的抑制作用增強(qiáng)；SP600125作用原頭節(jié)不