腫瘤細(xì)胞HeLa膜表面唾液酸表達(dá)對(duì)細(xì)胞間隙連接通訊的影響及機(jī)制研究.pdf

1、細(xì)胞間隙連接通訊(gap junction intercellular communication，GJIC)是細(xì)胞問(wèn)的直接通訊方式，廣泛存在于脊椎動(dòng)物與非脊椎動(dòng)物細(xì)胞中，可以介導(dǎo)細(xì)胞間小分子物質(zhì)的傳遞，而不需要通過(guò)細(xì)胞間質(zhì)。被認(rèn)為在許多生理病理過(guò)程中起重要作用，比如細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化，保持機(jī)體的內(nèi)平衡，細(xì)胞粘附和運(yùn)動(dòng)，傳播動(dòng)作電位，致瘤及創(chuàng)傷愈合等。研究表明GJIC與腫瘤密切相關(guān)，多數(shù)腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)為GJIC能力降低或喪失，連接蛋白表

2、達(dá)降低、不表達(dá)或胞內(nèi)異常定位。腫瘤細(xì)胞的脫落、侵襲、轉(zhuǎn)移都與GJIC的異常有關(guān)，而恢復(fù)GJIC可以抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展，GJIC已成為腫瘤預(yù)防與治療研究的潛在靶點(diǎn)之一。 唾液酸是細(xì)胞膜上糖蛋白和糖脂的重要成分，其代謝與腫瘤增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)。腫瘤細(xì)胞表面唾液酸含量明顯升高，如在正常宮頸細(xì)胞中不表達(dá)，在宮頸癌組織中有表達(dá)，在細(xì)胞分化程度低、臨床分期晚、發(fā)生轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后差的患者中高表達(dá)。 大量文獻(xiàn)報(bào)道腫瘤細(xì)胞間的細(xì)胞通訊

3、降低，一方面與Cx43的合成減少有關(guān)，另一方面也與Cx43不能形成正確完整的通道有關(guān)，推測(cè)這與腫瘤細(xì)胞表面大量的異常糖鏈有關(guān)，這些糖鏈被認(rèn)為起到空間位阻的作用，阻礙了間隙連接通訊孔道的形成。研究證實(shí)使用衣霉素抑制細(xì)胞糖基化過(guò)程有助于通道的開(kāi)放。我們推測(cè)腫瘤細(xì)胞表面唾液酸的異常增多也能影響GJIC。文獻(xiàn)報(bào)道Cx43是一個(gè)不含糖基化位點(diǎn)的蛋白，因此唾液酸的減少不會(huì)對(duì)其起到直接的作用。推測(cè)其它蛋白上唾液酸減少(如細(xì)胞間粘附分子)影響了自身的功

4、能，引起一系列的變化，從而影響了Cx43的磷酸化及分布，并影響通道的形成、開(kāi)放。 本文旨在利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)、多種激光生物學(xué)(LSM、FCM)技術(shù)，研究腫瘤細(xì)胞表面唾液酸的異常表達(dá)對(duì)GJIc的影響及其分子機(jī)制，確證腫瘤細(xì)胞膜表面大量異常唾液酸表達(dá)對(duì)細(xì)胞間隙連接通訊抑制的理論假設(shè)，并探討其分子機(jī)制。 發(fā)現(xiàn)唾液酸酐酶去除HeLa細(xì)胞表面α2-3及α2-6唾液酸后，用劃痕染料示蹤(SLDT)及熒光淬滅恢復(fù)(