人參皂甙Rg3對MCF-7細胞Cx26基因表達及細胞間隙連接通訊功能的影響.pdf

1、目的：研究人參皂甙Rg3對人乳腺癌細胞株MCF-7增殖抑制作用，連接蛋白基因(Connexin26，Cx26)的表達及對細胞間隙連接通訊(Gapi unction intercellular tommunication，GJIC)功能的影響，從而探討人參皂甙Rg3抑制腫瘤細胞生長、轉(zhuǎn)移潛能的可能機制，為臨床腫瘤輔助治療中應用人參皂甙Rg3提供理論依據(jù)。 方法：體外培養(yǎng)人乳腺癌細胞株MCF-7，采用四甲基四甲基偶氮唑藍(MTT)

2、法檢測人參皂甙Rg3對人乳腺癌細胞株MCF-7增殖活力的影響；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測人參皂甙Rg3作用后Cx26表達情況；通過劃痕標記熒光傳輸實驗檢測GJIC功能的恢復情況。 結(jié)果：1.不同濃度的人參皂甙Rg3作用一定時間后，對MCF-7細胞增殖的抑制作用：人參皂甙Rg3在濃度為10Iμg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml分別作用于人乳腺癌細胞株MCF-

3、7。24h后抑制率分別為3.1﹪、5.2﹪、16.0﹪、26.3﹪、29.1﹪、50.4﹪。Rg3處理組與空白對照組比較，濃度為40μg/ml以上均明顯抑制腫瘤細胞增殖(P<0.05)；48h后抑制率分別為6.0﹪、12.4﹪、30.3﹪、60.6﹪、69.1﹪、74.0﹪，20μg/ml以上均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。作用時間上比較，24h和48h人參皂甙Rg3對腫瘤細胞的抑制率無統(tǒng)計學差異(．P=0.051)。形態(tài)學分析，在倒置

4、顯微鏡下可見，經(jīng)藥物作用后MCF-7細胞數(shù)目減少，細胞形態(tài)由原來的貼壁良好、飽滿、多角形、梭形變?yōu)轭悎A形、懸浮、顏色變暗、無折光性，且隨藥物濃度的增加細胞形態(tài)變化越大。2RT-PCR檢測Rg3對基因Cx26的表達水平：各實驗組和空白對照組分別作用MCF-7細胞24h后，提取各組細胞mRNA，然后進行PCR反應。在凝膠成像系統(tǒng)下觀察：對照組和藥物組均有Cx26基因、內(nèi)參基因GAPDH的表達，經(jīng)Lab-work軟件分析對照組Cx26表達較藥

5、物組弱，在藥物組隨濃度增加(40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)Cx26表達增強。方差分析：對照組與藥物組濃度為40μg/ml、80μg/ml相比，無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；與濃度160μg/ml相比有顯著的統(tǒng)計學差異(P=0.01)。藥物組各個濃度之間比較：濃度160μg/ml分別與濃度40μg/ml、80μg/ml相比，均有顯著的統(tǒng)計學差異(P<0.01)，但是40μg/ml與80μg/ml這兩個濃度組相比無顯著差

6、異(P>0.05)。3．劃痕標記熒光傳輸實驗 Lucifer Yellow劃痕標記熒光傳輸實驗顯示，對照組培養(yǎng)的MCF-7細胞，Lucifer Yellow熒光染色僅限于單個細胞。實驗組經(jīng)Rg3處理后Lucifer Yellow熒光通過細胞間隙連接傳輸至相鄰細胞，形成片狀熒光染色，人參皂甙Rg3作用后，腫瘤細胞的間隙連接通訊功能有所恢復。結(jié)論：1．人參皂甙Rg3對MCF-7腫瘤細胞有一定的抑制作用，并且隨藥物濃度的增加，對腫瘤細胞的增殖