間隙連接蛋白Cx26和Cx43的表達與食管鱗癌浸潤、轉移關系的研究.pdf

1、背景與目的：
　　 食管癌(esophageal carcinoma，EC)是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生發(fā)展是一個多因素、多步驟、復雜的漸進過程，腫瘤細胞的浸潤轉移是食管癌治療失敗和病人死亡的主要原因。細胞間隙連接(gap junction，GJ)由兩個相鄰細胞膜上4個連接子(connexon)相互銜接而成，是普遍存在于細胞間的膜通道結構。每個連接子由6個相同的連接蛋白亞單位構成，每個亞單位即稱為細胞間隙連接蛋白(conn

2、exin，Cx)。細胞間隙連接通訊(gap junction intercellularcommunication，GJIC)是由相鄰細胞間通過間隙連接所介導一種通訊方式，參與了細胞間能量和信息的傳遞及電信號傳導的電偶聯(lián)和細胞間物質交換的代謝偶聯(lián)，在調(diào)控細胞的增殖、分化、新陳代謝以及內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等生理過程中發(fā)揮著重要作用。間隙連接蛋白異常表達所導致的細胞間物質和信息交流功能的缺陷與多種腫瘤的惡性增殖和轉化密切相關，有學者認為，惡性腫瘤的

3、發(fā)生及惡性表型可能與間隙連接蛋白基因表達受抑、GJIC功能的抑制密切相關。作為GJIC基本結構單位的Cx是一個多基因，發(fā)育上保守的大家族，連接蛋白的表達既有其組織特異性，又有交叉現(xiàn)象。為進一步研究基因Cx43和Cx26與食管鱗癌發(fā)生及浸潤轉移之間的關系，尋找能夠早期發(fā)現(xiàn)食管鱗癌發(fā)生和浸潤轉移的有效指標，并探討抑制食管鱗癌發(fā)生和浸潤轉移的方法，本文采用免疫組化SP法及RT-PCR法聯(lián)合檢測了食管鱗癌組織42例、癌旁不典型增生組織17例及4

4、2例正常食管黏膜組織中Cx43、Cx26基因和蛋白的表達情況；并探討Cx26和Cx43基因之間的相互關系。通過本研究，試圖闡明Cx26、Cx43的表達在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展及浸潤、轉移中的意義；并進一步闡明Cx26、Cx43基因抑制食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展及浸潤、轉移的機制。本研究為進一步探討食管鱗癌發(fā)生發(fā)展及浸潤轉移的分子學機理及尋找抑制食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展的有效方法提供理論基礎。
　　 材料與方法：
　　 1.42例食管癌手術

5、切除標本分別取自鄭州大學第一附屬醫(yī)院和第二附屬醫(yī)院，所有患者術前均未行化療、放療及免疫治療，均經(jīng)病理組織學證實為鱗狀細胞癌，其中包括Ⅰ級19例，Ⅱ級15例，Ⅲ級8例；分為淋巴結轉移組14例和無淋巴結轉移組28例，前者手術清掃的食管周圍淋巴結中發(fā)現(xiàn)癌轉移，后者未發(fā)現(xiàn)癌轉移。據(jù)浸潤深度分為淺層組15例，腫瘤浸潤深度在淺肌層以下，包括粘膜層、粘膜下層；和深層組27例，腫瘤超過淺肌層浸潤至深肌層或外膜層。每例標本均在癌灶及遠端正常粘膜組織處分別

6、取材。
　　 2.分別運用RT-PCR及免疫組化SP法檢測了42例食管鱗癌、正常食管粘膜組織及17例癌旁組織中Cx26及Cx43基因和蛋白的表達情況。
　　 3.所有實驗數(shù)據(jù)采用SPSS11.0軟件包進行統(tǒng)計分析，多樣本率的比較采用行列表資料的x2檢驗，兩樣本率的比較采用四格表資料的x2檢驗，差異性分析用配對x2檢驗，相關性檢驗用Spearma，相關分析，計量資料采用t檢驗，取α.=0.05為顯著性檢驗水準。
　　

7、 結果：
　　 1.Cx26mRNA在正常食管粘膜中相對表達量為0.879±0.046，而在癌旁不典型增生組織及癌組織中分別為0.787±0.084、0.707±0.097，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；在Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級食管鱗癌組織中Cx26mRNA相對表達量分別為0.816±0.074，0.766±0.092，0.758±0.099，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）；在淺層浸潤組和深層浸潤組癌組織中Cx26mRNA相對

8、表達量分別為0.847±0.112，0.785±0.090，兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；Cx26mRNA相對表達量在有淋巴結轉移組癌組織(0.768±0.113)低于無淋巴結轉移組癌組織(0.825±0.083)，兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05).
　　 2.Cx43mRNA在正常食管粘膜中相對表達量為0.783±0.051，而在癌旁不典型增生組織及癌組織中分別位0.715±0.037、0.692±0.08

9、4，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）田在Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級食管鱗癌組織中Cx43mRNA相對表達量分別為0.731±0.084，0.707±0.085，0.638±0.038，差異有統(tǒng)計學意義(.P＜0.05)；在淺層浸潤組和深層浸潤組癌組織中Cx43mRNA相對表達量分別為0.726±0.105，0.681±0.059，兩組相比差異有顯著性意義(P＜0.05）；Cx43mRNA相對表達量在有淋巴結轉移組癌組織(0.638±0.113)低

10、于無淋巴結轉移組癌組織(0.785±0.083)，差異有顯著性意義(P＜0.05）.
　　 3.食管鱗癌組織中Cx26蛋白表達率40.5％(17/42)，顯著低于癌旁不典型增生組織70.6％(12/17)及正常食管粘膜95.2％(40/42);癌組織分化程度越低，Cx26陽性率越低，在Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級食管鱗癌組織中Cx26蛋白表達率分別為68.4％，20.0％及12.5％，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);Cx26蛋白表達的陽

11、性率隨癌組織浸潤深度的加深而明顯降低，淺層浸潤組和深層浸潤組癌組織中Cx26蛋白陽性表達率分別為93.3％(14/15)，11.1％(3/27)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）；有淋巴結轉移組Cx26蛋白的表達率21.4％(6/28)明顯低于無淋巴結轉移組78.6％(11/14)，兩組相比差異也有顯著性(P＜0.05)。
　　 4.食管鱗癌組織中Cx43蛋白表達率31.0％(13/42)，顯著低于癌旁不典型增生組織64.7％(

12、11/17)及正常食管粘膜88.1％(37/42);癌組織分化程度越低，CX43陽性率越低，在Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級食管鱗癌組織中Cx43蛋白表達率分別為47.4％，26.7％及0％，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);Cx43蛋白表達的陽性率隨癌組織浸潤深度的加深而明顯降低，淺層浸潤組和深層浸潤組癌組織中Cx43蛋白陽性表達率分別為73.3％(11/15)，7.4％(2/27)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)：有淋巴結轉移組Cx43蛋白的

13、表達率7.1％(2/28)明顯低于無淋巴結轉移組78.6％(11/14)，兩組相比差異也有顯著性(P＜0.05）。
　　 5食管鱗癌組織Cx26mRNA表達和蛋白表達之間呈正相關關系，Cx26蛋白表達陽性的17例病例中，其相對含量（x±s）為0.830±0.070，Cx26蛋白表達陰性的25例病例中，相對含量（x±s）為0.772±0.119，兩組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 6.食管鱗癌組織Cx43m

14、RNA表達和蛋白表達之間呈正相關關系，Cx43蛋白表達陽性的13例病例中，其相對含量（x±s）為0.762±0.044，CX43蛋白表達陰性的29例病例中，相對含量（x±s）為0.645±0.071，兩組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 7.Cx26蛋白的表達和CX43蛋白表達之間呈正相關關系，Cx26蛋白表達陽性的病例中，Cx43蛋白的陽性表達率為70.6％(12/17)，Cx26蛋白表達陰性的病例中，Cx43蛋

15、白的陰性表達率為96.0％(24/25)，兩者差異有顯著性意義(P＜0.05）.
　　 結論：
　　 1.食管鱗癌組織中Cx26、Cx43蛋白及mRNA的陽性表達均低于癌旁不典型增生組織及正常食管粘膜組織，提示Cx26、Cx43mRNA和蛋白表達降低可能與食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展有關。
　　 2.Cx26、Cx43mRNA和蛋白表達與食管鱗癌的浸潤深度、淋巴結轉移密切相關，提示其基因表達缺失或減少可能參與了食管鱗癌的局