睪酮通過(guò)ERK1-2信號(hào)途徑刺激人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生成TFPI.pdf

1、背景與目的：
　　男性性別是一個(gè)獨(dú)立的心血管疾病發(fā)病(cardiovascular disease,CAD)的危險(xiǎn)因子,睪酮(Testosterone,T)是人體內(nèi)最主要的雄激素,它在動(dòng)脈粥樣硬化(artherosclerosis, AS)中的作用及機(jī)理尚無(wú)明確報(bào)道,我們的前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)生理濃度睪酮可促進(jìn)人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞合成、分泌組織因子途徑抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI),增強(qiáng)內(nèi)

2、皮細(xì)胞抗凝活性,具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。本研究在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,擬觀察睪酮對(duì)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶ERK1/2磷酸化水平的影響,研究ERK1/2的激活與TFPI表達(dá)的關(guān)系,探討睪酮調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞合成分泌TFPI的具體機(jī)制。
　　方法：
　　1.將體外培養(yǎng)的HUVEC分為單純培養(yǎng)基對(duì)照組,4個(gè)時(shí)間段睪酮組(睪酮作用后5、15、30、60 min)和雄激素受體拮抗劑氟他胺(Flutamide組)預(yù)處理組(F+T組),Wester

3、n-blotting法檢測(cè)睪酮作用于HUVEC后ERK1/2的活化程度。
　　2.將體外培養(yǎng)的HUVEC細(xì)胞分為單純培養(yǎng)基對(duì)照組(Control組)、睪酮處理組(T組)、ERK1/2抑制劑PD98059處理組(PD組)、PD98059預(yù)處理組(PD+T組),ELISA法測(cè)各組TFPI蛋白水平, Real-Time RT-PCR檢測(cè)各組TFPI轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.生理濃度睪酮可激活HUVECs內(nèi)的E

4、RK1/2信號(hào)通路,并于30min后達(dá)到高峰,而雄激素受體拮抗劑氟他胺可部分抑制睪酮對(duì)ERK1/2的激活作用。
　　2.生理濃度睪酮組作用后,TFPI蛋白和mRNA相比明顯增加,經(jīng)ERK1/2抑制劑PD98059預(yù)處理后,TFPI的表達(dá)受到明顯抑制。
　　結(jié)論：
　　1.生理濃度睪酮可通過(guò)與雄激素受體結(jié)合從而促進(jìn)ERK1/2磷酸化,且在作用30分鐘后達(dá)到最大效應(yīng)。
　　2.生理濃度睪酮可通過(guò)ERK1/2途徑來(lái)促進(jìn)