睪酮在炎癥狀態(tài)下對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞組織因子途徑抑制物表達(dá)的調(diào)節(jié)及機(jī)制.pdf

1、背景:
　　急性冠脈綜合征(ACS)是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)的危重癥,盡管其發(fā)病存在明顯的性別差異,但雄激素在冠心病中的作用一直存在爭(zhēng)議,是目前心血管領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一;研究證實(shí)血管內(nèi)皮抗凝活性降低、血栓形成是急性冠脈綜合征的主要特征。我們前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)生理濃度睪酮(Testosterone, T)可促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)重要抗凝物質(zhì)組織因子途徑抑制物(TFPI)的表達(dá),并且可以調(diào)節(jié)包括核因子-kappaB(

2、NF-κB)在內(nèi)的多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子的活性。NF-κB是炎癥過程的重要介質(zhì),其活化所誘導(dǎo)的炎癥因子表達(dá)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)致炎因子諸如腫瘤壞死因子-alpha(TNF-α)可以調(diào)節(jié)包括凝血啟動(dòng)因子——組織因子(TF)在內(nèi)的多個(gè)血栓因子活性,且對(duì)部分因子的調(diào)節(jié)是通過活化NF-κB途徑實(shí)現(xiàn),由此可見睪酮及TNF-α對(duì)NF-κB活性均有調(diào)節(jié)作用,然而睪酮是否可以干預(yù)TNF-α誘導(dǎo)的炎癥狀態(tài)下抗凝因子TFPI的表達(dá)從而促

3、進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥狀態(tài)下的抗凝活性,并且其調(diào)節(jié)是否通過核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB通路實(shí)現(xiàn)目前尚未見報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)即對(duì)上述問題進(jìn)行探討。
　　目的:
　　通過體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,觀察生理濃度睪酮、TNF-α處理后TFPI表達(dá)及NF-κB活性的變化,探討生理濃度睪酮對(duì)TNF-α介導(dǎo)的炎癥狀態(tài)下內(nèi)皮細(xì)胞TFPI表達(dá)的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制。
　　方法:
　　(1)將體外培養(yǎng)的3-4代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)分為空白組(無細(xì)胞

4、組)、單純培養(yǎng)基對(duì)照組、生理濃度睪酮(30nmol/L)組、TNF-α(10ng/mL)組、TNF-α(20ng/mL)組以及后兩者分別與睪酮共同作用組,培養(yǎng)48h后用MTT方法檢測(cè)細(xì)胞活性;(2)HUVEC3-4代分為單純培養(yǎng)基對(duì)照組、生理濃度睪酮(30nmol/L)組、TNF-α(20ng/mL)組以及兩者共同作用組,培養(yǎng)48h后ELISA法測(cè)各組上清液中總TFPI蛋白含量, real-time RT-PCR檢測(cè)各組TFPI mRN

5、A表達(dá);(3)生理濃度睪酮(30nmol/L)、TNF-α(20ng/mL)分別干預(yù)以及共同作用于HUVEC12h后,應(yīng)用電泳遷移率變動(dòng)分析(EMSA)技術(shù),檢測(cè)NF-κB活性變化。
　　結(jié)果:
　　(1)睪酮及各濃度TNF-α分別作用或共同干預(yù)48小時(shí)對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞活性沒有明顯影響;(2)TNF-α(20ng/mL)可顯著下調(diào)TFPI mRNA和蛋白的水平(P<0.001),而生理濃度睪酮(30nmol/L)可減輕TNF

6、-α對(duì)TFPI表達(dá)的抑制作用(P<0.05);(3)TNF-α(20ng/mL)可以明顯激活NF-κB(P<0.05),而生理濃度睪酮(30nmol/L)不但可以單獨(dú)抑制NF-κB活性而且可以減弱TNF-α對(duì)NF-κB的活化作用(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,致炎因子TNF-α可以抑制TFPI的表達(dá);而生理濃度睪酮可減弱TNF-α對(duì)TFPI表達(dá)的抑制,從而發(fā)揮了其在炎癥狀態(tài)下防止血栓形成的作用;而該作