DDAH-ADMA系統(tǒng)對內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、急性冠脈綜合癥(ACS)是心血管疾病患者死亡的重要原因，而動脈粥樣斑塊破裂和血栓形成為ACS發(fā)生的病理基礎(chǔ)。組織因子(TF)啟動的凝血系統(tǒng)在動脈血栓形成中起主要作用。血管內(nèi)皮是維持血流動力學(xué)穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，在激活或損傷的情況下能表達(dá)大量TF。非對稱二甲基精氨酸(ADMA)是內(nèi)源性一氧化氮合酶(NOS)抑制物，能抑制一氧化氮(NO)的合成和誘導(dǎo)內(nèi)皮功能不全。二甲基精氨酸-二甲胺水解酶(DDAH)是調(diào)節(jié)ADMA水平的關(guān)鍵酶。臨床研究證明

2、，血漿ADMA水平在ACS患者中顯著升高，被認(rèn)為是一個新的心血管疾病危險因子。基于ADMA與TF水平均為ACS預(yù)后的重要指標(biāo)以及NO參與TF表達(dá)的調(diào)節(jié)，因此，本實驗擬研究DDAH/ADMA系統(tǒng)對內(nèi)皮細(xì)胞TF表達(dá)的影響及其機制，從血栓形成的角度闡明ADMA與ACS發(fā)生的關(guān)系。 方法：培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)；構(gòu)建hDDAH2 cDNA表達(dá)質(zhì)粒，脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染入HUVECs。不同濃度的ADMA(1-10μM)處理HUVE

3、Cs不同時間點(6-24 h)或溶血性磷脂酰膽堿(LPC，10μg/ml)處理24 h。一期凝固法檢測細(xì)胞TF促凝活性；逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測TF和DDAH2 mRNA水平；高效液相色譜法檢測培養(yǎng)液中ADMA水平。 結(jié)果：①ADMA呈濃度和時間依賴性增加內(nèi)皮細(xì)胞TF活性和上調(diào)TF mRNA表達(dá)。預(yù)先使用左旋精氨酸(0.5 mM)，p38-絲裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)特異性阻斷劑SB239063(10μM)或細(xì)

4、胞內(nèi)抗氧化劑PDTC(10μM)均能顯著抑制ADMA所致的TF活性及mRNA表達(dá)的增加。②LPC(10μg/ml)孵育內(nèi)皮細(xì)胞24 h能顯著增加TF活性和mRNA表達(dá)以及培養(yǎng)液中ADMA水平。過表達(dá)hDDAH2基因可顯著抑制LPC誘導(dǎo)的TF活性和mRNA表達(dá)增加。 ③全反式維甲酸(1-10μM)呈濃度依賴性的抑制LPC誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞TF活性和mRNA表達(dá)增加，同時呈濃度依賴性的上調(diào)DDAH2 mRNA的表達(dá)和降低培養(yǎng)液中ADMA