白介素-6誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)和川芎嗪的抑制效應(yīng).pdf

1、許多研究表明，體內(nèi)存在一個(gè)炎癥-凝血網(wǎng)絡(luò)。促炎介質(zhì)(TNFα、IL-6等)既引起炎癥反應(yīng)，又促進(jìn)凝血過(guò)程，二者均屬于防衛(wèi)反應(yīng)的重要組成部分。血液凝固過(guò)程中的絲氨酸蛋白酶不僅參與凝血因子的激活，還可導(dǎo)致一系列細(xì)胞反應(yīng)，特別是通過(guò)特定的受體參與炎癥反應(yīng)。在這些反應(yīng)過(guò)程中，激活的血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)表面表達(dá)的組織因子(TF)可能是炎癥和血栓形成之間重要的銜接物。 靜息狀態(tài)下，VEC通過(guò)嚴(yán)格控制凝血系統(tǒng)與抗凝系統(tǒng)之間的平衡來(lái)調(diào)節(jié)生理性

2、止血。TF在VEC、單核細(xì)胞中的促凝活性具有非常重要的生物學(xué)意義。TF是一種跨膜糖蛋白，可與FVII、FVIIa結(jié)合形成復(fù)合物，并加速FVII成為FVIIa。實(shí)驗(yàn)證明，TF的表達(dá)與許多疾病的血栓形成密切相關(guān)，包括敗血癥、DIC、動(dòng)脈粥樣硬化、心腦血管血栓性事件(如心肌梗死和腦梗塞等)。 白介素-6(IL-6)作為體內(nèi)主要的炎癥因子之一，有著廣泛的生物學(xué)活性，在機(jī)體受到創(chuàng)傷和感染時(shí)所產(chǎn)生的急性期反應(yīng)中，發(fā)揮著中樞性的協(xié)調(diào)作用。在多

3、種嚴(yán)重感染性疾病和心血管事件中，血漿IL-6濃度顯著升高，而且IL-6濃度升高水平和死亡率間存在著正相關(guān)關(guān)系。在動(dòng)脈粥樣硬化和急性冠脈綜合征等疾病的發(fā)生中起著和腫瘤壞死因子α-樣重要的作用。IL-6的生物學(xué)作用是通過(guò)和IL-6受體結(jié)合來(lái)完成的。由于VEC膜上缺乏IL-6受體，因此長(zhǎng)期以來(lái)VEC表達(dá)TF和IL-6的關(guān)系缺乏報(bào)道。新近發(fā)現(xiàn)IL-6可和血漿中可溶性IL-6受體(sIL-6R)結(jié)合，而后該復(fù)合物通過(guò)和gp-130進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，這

4、為研究IL-6對(duì)VEC表達(dá)TF提供了可能性。但這一假設(shè)有待事實(shí)證明。 IL-6在體內(nèi)生物作用廣泛，對(duì)多種細(xì)胞具有調(diào)控作用。根據(jù)已有資料，它在細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)主要涉及JAK激酶／信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(JAK2／STAT3)和絲裂原活化蛋白激酶(Ras／MAPK)，不同細(xì)胞可能各有側(cè)重。其次，大量實(shí)驗(yàn)提示在TF表達(dá)調(diào)控中，蛋白激酶C(PKC)途徑起著關(guān)鍵作用，并且也有報(bào)道PKC途徑也參與了IL-6的生物學(xué)作用，同時(shí)不同信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途

5、徑之間可能存在網(wǎng)絡(luò)關(guān)系。因此，如果IL-6的確可以調(diào)控VEC的TF表達(dá)，那么它的信號(hào)途徑究竟如何?這也是本研究必須回答的問(wèn)題。 由于IL-6參與許多疾病的發(fā)病學(xué)過(guò)程，所以，探索針對(duì)IL-6的干預(yù)措施，對(duì)于發(fā)病學(xué)和臨床防治均有重要的啟示意義。祖國(guó)醫(yī)學(xué)是一個(gè)偉大寶庫(kù)。已有資料表明川芎具有顯著的活血化瘀作用，其主要有效成分是川芎嗪(TMP)。本室業(yè)已報(bào)道TMP能明顯抑制凝血酶誘導(dǎo)的單個(gè)核細(xì)胞-血小板的聚集反應(yīng)。新近工作提示，在白細(xì)胞

6、-血小板反應(yīng)引起炎癥與凝血過(guò)程中，TF表達(dá)起著關(guān)鍵作用。因此，TMP是否對(duì)IL-6誘導(dǎo)VEC表達(dá)TF也具有抑制作用，這是值得試探的重要工作。 目的:基于上述設(shè)想，本研究的主要內(nèi)容包括：①確定IL-6和可溶性的IL-6受體結(jié)合后形成的復(fù)合物能否結(jié)合于VEC上；②觀察促炎性細(xì)胞因子IL-6對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株組織因子(TF)表達(dá)的影響；③探討IL-6誘導(dǎo)VEC表達(dá)TF的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑；④觀察TMP對(duì)IL-6誘導(dǎo)VEC表達(dá)TF的影

7、響。 方法:ECV304培養(yǎng)采用RPMI-1640完全培養(yǎng)基；免疫熒光法觀察工L一6／可溶性IL-6受體復(fù)合物和VEC的結(jié)合；常規(guī)生化方法檢測(cè)上清液中LDH含量；MTT法觀察細(xì)胞活力；電子顯微鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變；用DEGR-VIIa(TF特異性阻斷劑)生物活性法和抗TF單克隆抗體法確認(rèn)TF活性；一期凝固法測(cè)總的細(xì)胞促凝活性(PCA)；細(xì)胞TF抗原測(cè)定采用ELISA法；TF mRNA采用RT-PCR的方法檢測(cè)。以特異性阻斷