川芎嗪對(duì)妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥患者血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的作用.pdf

1、目的:1.研究妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥(ICP)患者血清對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的影響,探討VEGF與妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥發(fā)病的關(guān)系.2.檢測(cè)中藥川芎嗪對(duì)VEGF表達(dá)的影響,并為川芎嗪用于預(yù)防和治療妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥提供理論依據(jù).方法:1.用膠原酶灌注法行原代HUVEC培養(yǎng),Giemsa染色行形態(tài)學(xué)觀察,用鼠抗人第Ⅷ因子抗體進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞鑒定及純度分析.2.選取ICP患者22例及正常孕婦13例,抽取靜脈血清,

2、追蹤隨訪至妊娠結(jié)局,統(tǒng)計(jì)兩組臨床特征.隨機(jī)選取各12例進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn).3.MTT法檢測(cè)不同濃度的ICP患者血清及正常孕婦血清(0％、5％、10％、15％、20％)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞活力的影響;檢測(cè)不同濃度的川芎嗪(0 μg/ml、25 μg/ml、50 μ g/ml、100 μ g/ml、200 μ g/ml)對(duì)20％ICP患者血清孵育的內(nèi)皮細(xì)胞活力的影響,并與20％正常孕婦血清對(duì)照.4.ELISA法檢測(cè)不同濃度的ICP血清及正常孕婦血清(10％

3、,20％)作用不同時(shí)間(12小時(shí)、24小時(shí)、36小時(shí))對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞分泌的VEGF蛋白的影響.5.用不同濃度的川芎嗪(0 μ g/ml、25 μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)干預(yù)20％ICP患者血清孵育的內(nèi)皮細(xì)胞,用ELISA及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清及胞漿中的VEGF蛋白量,并與20％正常孕婦血清對(duì)照.結(jié)果:1.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨著血清濃度的升高,ICP組內(nèi)皮細(xì)胞OD<,490>值逐漸減低,

4、而正常孕婦組內(nèi)皮細(xì)胞OD<,490>值逐漸增高.兩組5％濃度組OD<,490>值與0％濃度組比較P>0.05;10％、15％、20％濃度組OD<,490>值與0％濃度組比較P<0.05.隨著川芎嗪濃度的升高,內(nèi)皮細(xì)胞OD<,490>值逐漸增加(P<0.05),到100 μg/ml達(dá)到高峰.2.ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:隨著血清濃度的增加,作用時(shí)間的延長(zhǎng),ICP組內(nèi)皮細(xì)胞分泌VEGF逐漸減少(P<0.05),而正常孕婦組內(nèi)皮細(xì)胞分泌VEGF

5、逐漸增多(P<0.05).3.ELISA及免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示隨著川芎嗪藥物濃度的增加,內(nèi)皮細(xì)胞分泌的VEGF蛋白逐漸增多(P<0.05),到100 μg/ml達(dá)到高峰.4.ICP組與正常孕婦組臨床特征比較:ICP組新生兒體重顯著低于正常孕婦組,羊水糞染程度顯著高于正常孕婦組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.結(jié)論:1. ICP患者血清對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞具有毒性作用,使細(xì)胞生長(zhǎng)受限,活細(xì)胞數(shù)量減少,并呈濃度依賴性.2.ICP患者血清對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌V

6、EGF蛋白有抑制作用,此作用呈濃度,時(shí)間依賴性.ICP患者血清對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的毒性作用可能是由于抑制了內(nèi)皮細(xì)胞分泌VEGF蛋白所致.3.川芎嗪對(duì)ICP患者血清損傷的內(nèi)皮細(xì)胞有保護(hù)作用,此作用隨藥物濃度增加逐漸增大,到100 μg/ml達(dá)到高峰.4.川芎嗪可以拮抗ICP患者血清抑制內(nèi)皮細(xì)胞分泌VEGF的作用,此作用隨藥物濃度增加逐漸增大,到100 μg/ml達(dá)到高峰.5.川芎嗪對(duì)ICP患者血清損傷的內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用可能是由于促進(jìn)了內(nèi)皮細(xì)胞分