Preptin通過ERK-CTGF信號(hào)途徑誘導(dǎo)人成骨細(xì)胞增殖和分化.pdf

1、目的：
　　 研究Preptin對(duì)人成骨細(xì)胞增殖和分化的影響,并探討其作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 原代培養(yǎng)的人成骨細(xì)胞取材于已排除代謝性骨病的正常成人,通過堿性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型膠原酶、骨鈣素表達(dá)水平和礦化結(jié)節(jié)形成鑒定成骨細(xì)胞表型。通過干預(yù)組與對(duì)照組比較,觀察Preptin刺激人體成骨細(xì)胞的增殖和分化的劑量效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)；人成骨細(xì)胞的增殖用[3H]thymidine摻入法檢測(cè),分化程度用人成骨細(xì)胞裂解蛋白

2、中堿性磷酸酶表達(dá)水平判斷,分光光度計(jì)法測(cè)量p-硝基苯酚以測(cè)定堿性磷酸酶活性。通過檢測(cè)釋放到人成骨細(xì)胞培養(yǎng)基中的結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF),觀察Preptin是否誘導(dǎo)人成骨細(xì)胞CTGF表達(dá)及其劑量和時(shí)間效應(yīng),CTGF用Western blot法檢測(cè)。通過小分子RNA干擾技術(shù)(siRNA)抑制人成骨細(xì)胞CTGF的表達(dá),以及在Preptin干預(yù)前用細(xì)胞信號(hào)阻斷劑(PD98059、SP600125或SB203580)預(yù)處理阻斷人成骨細(xì)胞絲裂原

3、活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),以分析CTGF和MAPK信號(hào)通路是否以及如何在Preptin誘導(dǎo)人成骨細(xì)胞增殖和分化中發(fā)揮作用。p38MAPK、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基端激酶(JNK)及其磷酸化水平p-p38、p-ERK1/2、p-JNK用Western blot法檢測(cè)。
　　 結(jié)果：
　　 Preptin可促進(jìn)人成骨細(xì)胞增殖和增加堿性磷酸酶活性。Preptin可呈劑量和時(shí)間依賴方式調(diào)節(jié)人成骨

4、細(xì)胞CTGF的表達(dá),通過siRNA敲除人成骨細(xì)胞CTGF的表達(dá)可降低Preptin誘導(dǎo)的人成骨細(xì)胞增殖和分化。Preptin可誘導(dǎo)人成骨細(xì)胞ERK的磷酸化,對(duì)p38或JNK無(wú)激活作用。此外,人成骨細(xì)胞用ERK阻斷劑PD98059預(yù)處理可使Preptin誘導(dǎo)的CTGF分泌降低,并阻斷Prepcin的促成骨細(xì)胞增殖和分化的效應(yīng)。
　　 結(jié)論：
　　 Preptin在人骨細(xì)胞中通過ERK/CTGF細(xì)胞通路調(diào)節(jié)骨合成代謝,可能是